细胞外囊泡与外泌体

除了siRNA和miRNA，mRNA也可以作为“货物”被外泌体运输。研究表明，在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分离出来的外泌体含有中流细胞特异性的mRNA，而被爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)感ran的细胞分泌的外泌体中也含有EBV的潜伏期mRNA。因而，外泌体的这种运载mRNA的能力引起了中流研究者们的注意。近期，Saydam等率先报道了利用多泡体(含外泌体)负载mRNA/蛋白进行中流zhiliao的研究。研究者们利用脂质体2000或病毒载体对HEK-293细胞进行转染，使其分泌的多泡体含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP，其中CD:胞嘧啶脱氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖转移酶;EGFP:增强型绿色荧光蛋白)。将此多泡体注射至小鼠的神经鞘瘤处，并辅助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神经鞘瘤的增长被明显抑制。随着EV研究倍受世界瞩目，各国启动了大型研究项目。细胞外囊泡与外泌体

外泌体的提取方法：超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。超速离心法得到的外泌的体量比较多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡而不是外泌体。过滤离心法，这种操作简单、省时，不会影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期的准备工作繁杂，比较耗时，量少。细胞外泌体提取试剂盒分类细胞表面受体表达不同，外泌体对受体细胞的影响可能不同，可能诱导细胞存活，也可能诱导凋亡或免疫调节等。

外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为病等各种疾病的生物标记话题比较热门。近些年关于外泌体研究很普遍，但是关于外泌体相关的实验技术，关于需要改进的课题存在很多。例如，外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质，给后续实验产生了许多障碍。抗体亲和法和密度梯度离心法，虽然可以提取到高纯度的外泌体，但不能提取完整外泌体，无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。而免疫印迹法（WB）和Elisa检测法作为被普遍应用的外泌体检测的一般方法，又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。

唾液中包含来自于唾液腺上皮体外细胞的外泌体，Michael等从唾液中提取外泌体，并对唾液外泌体中的miRNA进行分析，发现此类miRNA有望作为成为唾液腺疾病的生物标志物。Wu等成功从汗液中提取得到外泌体，并进行蛋白质组学分析，在汗液外泌体中鉴定到1062种蛋白质，其中包含多种抗jun肽和免疫因子，表明汗液外泌体参与皮肤免疫。Liu等从患有阿尔兹海默症患小鼠的脑脊髓液中提取得到外泌体，并与野生型小鼠进行对比，发现实验组miR-193b明显下调。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制，通过促进或压制释放机制。

外泌体是细胞间信息传递的重要“信使”,可通过三种方式介导细胞通讯:(1)外泌体以旁分泌的方式与靶细胞相互作用,通过受体–配体作用黏附到靶细胞表面,随后被内吞入靶细胞,或直接将内容物释放到靶细胞内,从而激huo靶细胞;(2)外泌体的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,产生的片段可以与靶细胞的细胞表面受体结合,从而激huo靶细胞;(3)外泌体还可以与靶细胞直接接触发生膜融合,导致外泌体中的蛋白和核酸非选择性转移到目标细胞,从而引起靶细胞的响应。通过介导细胞间的通讯,外泌体不jin能够参与多种生理过程,比如消除胞内陈旧分子、呈递抗原、分化调节性T淋巴细胞或髓样细胞以抑制免疫反应,而且还可以参与疾病形成的病理过程,如通过与受体细胞的相互作用传播病原物质、促进中流转移过程中的血管生长和中流细胞迁移。外泌体被认为是疾病的生物标志物和预后因子，具有重要的临床诊断和治理意义。血清提取试剂盒

外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而唤醒靶细胞细胞内的信号通路。细胞外囊泡与外泌体

一方面，外泌体可以通过调控细胞的恶性转化如细胞增殖、迁移和侵袭，促进HCC的发生和发展。另一方面，恶性瘤细胞分泌的外泌体可以协同其他瘤细胞一起，调控瘤微环境，以利于HCC发展。人HCC细胞外泌体中含有的一系列miRNAs，会减弱其他HCC细胞中TGF-β通路上的蛋白表达，促进HCC细胞的生长。HCC细胞外泌体还会诱导非致瘤性肝细胞发生细胞迁移和侵袭，具有运动能力的HCC通过释放外泌体诱导肝细胞分泌MMP-2和MMP-9，增强HCC细胞的侵袭能力。经HCC中分离到的CD90+外泌体处理的内皮细胞会表达更多的VEGF和VEGFR1，促进血管生成；同时诱导ICAM-1表达促进细胞转移。还有研究表明外泌体参与HCC缺氧胁迫和药物耐受的调控。细胞外囊泡与外泌体

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