成都腹水外泌体

已经有许多关于外泌体作用的报导，根据这些现象实验中，从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体，在活内是否真的能发生作用尚未能确定。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制，通过促进或压制释放机制，分析会引起何种生理作用，这是进一步研究的发展方向。甚至活内的外泌体动态（哪个外泌体迁移至何处）也会成为今后需要努力研究的重要课题。实际上，用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体，其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较，PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上，几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。外泌体的遗传分子与肝脏病理息息相关，在肝脏疾病诊断中可作为潜在的治理靶点或分子标志物。成都腹水外泌体

外泌体是具有双层脂膜的囊泡结构,其稳定性较好,可保护内部生物分子免受体液中各种酶的影响,从而保持其完整性和生物活性。外泌体被提取后一般悬浮于磷酸盐缓冲液。目前,常用的储存方法为冷冻保存,但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变,也可能导致多层囊泡的形成和聚集,反复冻融会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。血清中包含外泌体在内的细胞外囊泡DNA在不同储存环境可保持稳定,血浆存放于4°C时其RNA会明显降解,在–20°C下长期保存也会导致血浆中外泌体总RNA降解,但miRNA却十分稳定,这也提示了外泌体miRNA作为生物标志物的潜力。江苏CD81外泌体慢病毒包装各种细胞粘着分子在外泌体膜表面表达，由其决定外泌体被运输往哪一种细胞。

外泌体中存在着某些特定的蛋白质、脂质和多糖,基于抗原–抗体特异性识别和结合作用原理,可将外泌体从其他组分中分离出来。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜联蛋白、上皮细胞黏附分子或肝素等都可以作为抗原,而捕获外泌体的抗体可以附着在平板、磁珠、二氧化硅、树脂、膜亲和过滤器、纤维素滤膜、聚酰氨基胺树状聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶联免疫吸附法和磁珠法等。酶联免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作为抗体附着介质,其结果用吸光度值表示,该方法可以快速分析已知表面生物标志物的表达,也可以瞬时读出外泌体的产量和特异性。磁珠法多使用共价包覆链霉亲和素的磁珠,与样品一起孵育后可通过磁泳将被结合的外泌体从样品组分中分离出来。鉴于微米级磁珠可赋予更大的接触面积,该方法不jin具有高度特异性,还具有比超速离心更高的外泌体产率。

几乎所有的细胞都可以在自发或在一定刺激条件下产生外泌体，不同的细胞产生的外泌体具有不同的功能，这些外泌体参与了一系列生理和病理过程，如ai症发生与发展、抗原呈递、免疫调节、组织愈合等。来自血细胞(包括血小板、白细胞和红细胞)的外泌体具有参与凝血、提供促血管生成因子、诱导血管生成等生理功能;妊娠期外泌体能够影响局部血管生成、调节分化、激huo免疫、促进胚胎发育;肝脏细胞产生的外泌体有利于维护肝脏内稳态。由此可见，正常细胞产生的外泌体对维持机体的正常生命活动起重要作用。外泌体天然的可以携带遗传到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。

利用蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附分析技术可以对外泌体标志性蛋白质进行定性定量分析。其中蛋白免疫印迹是外泌体的经典表征手段之一，操作时往往需要细胞裂解液作为阴性对照。常用的外泌体标志性蛋白质包括四跨膜蛋白质CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)等，内参蛋白质可以是肌动蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脱氢酶，阴性对照蛋白可以是阻抑素(PHB，线粒体标志蛋白)或钙联结蛋白Calnexin。在酶联免疫吸附析法中，外泌体裂解液通过固载有抗体的固相基质，随后与检测抗体共孵育。两种方法均存在操作繁琐、耗时长的问题，相比较而言，酶联免疫吸附分析法比蛋白质免疫印迹法更加快速，适用于高通量分析。外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志，而且可作为天然的药物传递载体。外泌体自动收集仪

类风湿关节炎患者的滑膜成纤维细胞所释放的外泌体。成都腹水外泌体

外泌体的组成较为复杂，其内含有多种生物大分子，如：核酸（双链DNA和各种RNA亚型）、蛋白质和脂质。这些分子被外泌体携带进入血液循环，而后被靶细胞吸收，从而调节靶细胞基因表达和细胞功能。此外，外泌体相关的miRNA作为短单链和非编码RNA分子，调节致病基因或抑病基因的表达，参与细胞分化、细胞凋亡及细胞信号的传导。有研究表明，外泌体能影响种瘤微环境的形成、增强种瘤细胞的侵袭和转移能力、介导种瘤免疫压制及参与种瘤放化疗抵抗进而促进种瘤的发展。成都腹水外泌体