HE染色细胞质过染分析及应对原因:(1)伊红染色液浓度太高,特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在;(2)切片在伊红染色时间过长;(3)切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快,而使乙醇分化伊红的作用不能产生。对策:适当稀释伊红染色液,减少伊红染色时间,或者使切片在乙醇脱水等步骤时,停留时间相对均匀。同样,也要检查切片的厚度是否合适。切片中出现蓝黑色沉淀物分析及应对原因:苏木精染色液中的金属膜,黏附在玻片上。对策:每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液,如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。HE染色观察细胞形态变化。陕西结果客观的HE染色公司
HE染色全名苏木精—伊红染色法,属于化学染色法,其主要依靠苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。实验过程:1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。2、苏木素染色:切片入苏木素染液染3-5min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,返蓝液返蓝,流水冲洗。3、伊红染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脱水各5min,入伊红染液中染色5min。4、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I5min-无水乙醇II5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。5、显微镜镜检,图像采集分析。结果判读:细胞核呈蓝色,细胞质呈红色河南病理HE染色让您放心的实验外包公司,专业HE染色实验服务平台。
HE染色常见问题:Q3:细胞核染色过浅,颜色暗淡答:切片在苏木素染液中停留过短,或苏木素过度氧化失效,或分化时间太长。对策:重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液,每个3-5min即可,接着重新染色。可以适当地组织的嗜碱性以增强核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3h,自来水冲洗5-10min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h,自来水冲洗10min染色。Q4:细胞核染色过深,胞浆着蓝色答:切片在苏木素染液中停留过长;或切片太厚;或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度(比较好厚度1-2层细胞核),要么重新染色,要么重新制片。南京英瀚斯,专业的病理染色实验服务平台。
HE染色石蜡和冰冻切片样本的处理,样品处理:a.对于石蜡切片:二甲苯中脱蜡5-10分钟;换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟;无水乙醇5分钟;90%乙醇2分;70%乙醇2分钟;蒸馏水2分钟.b.对于冰冻切片:蒸馏水2分钟。c对于培养细胞:用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。苏木素伊红(HE)染色对于上述处理好的样品:苏木素染色液染色5-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。浸自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟。蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。95%乙醇5秒。伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。HE染色结果如何分析和读片?
HE染色反蓝的原理:苏木素染液,细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。 分化:苏木素染色之后,用水洗去未结合在细胞上的染液,但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去,才能保证细胞核和细胞浆染色的分明,把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构,使色素与组织解离,分化不可过度。蓝化:分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,在碱性条件下处于蓝色离子状态,而呈蓝色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色,称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝,也可用温水(50度温水比较好)变蓝。HE染色(脱蜡、水化、染色、脱水、封片) - 实验方法。贵州比较好的HE染色哪家好
HE染色原理 试剂 染色步骤 注意事项 。陕西结果客观的HE染色公司
HE染色注意事项:1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染苏木精后,分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行,一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅,应重新染色后再行分色。3、切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,更换酒精、二甲苯,以求彻底脱水与透明。4、在染色过程中不要让切片干燥,以免切片收缩、变形,影响神经元形态。5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前,切片周边均应擦干净或吸干多余水分。6、***封固时,要用中性树脂,防止日后褪色,盖片要选大于组织块的面积,如漏出一部分不久将会褪色,所用树脂浓度要适当,树脂封固时不能有气泡。陕西结果客观的HE染色公司