天津GingisREXIdeS蛋白酶抗体酶切

与IdeS不同，为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质，该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上，可以增加酶与蛋白质的比率，从而可以进一步加速反应，以获得更完整的连接子消化。此外，该酶不会存在于样品制备中，可能会干扰样品分析。为了进行比较，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜，或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖，并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明，GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物，其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化，两者都会产生几种 Fc 产物，并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外，在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充，Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子，有助于研究位于 GS 连接子的修饰。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性，又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。天津GingisREXIdeS蛋白酶抗体酶切

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明，所有三个连接子区域均被消解，α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰，α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化，表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比，四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体，剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中，α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离，导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如，在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外，240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。陕西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶用FabDELLO消化市售的IgG1 risankizumab(在下铰链区域具有LALA突变)。

Genovis是一家瑞典生物技术公司，自2010年起，为生物制药公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列独特、快速且易于使用的酶学工具，主要用于生物制药行业和学术界。我们在全球范围内提供创新的智能酶SmartEnzymes™，用于单克隆抗体、ADC、生物仿制药和双特异性生物药物的开发、生产和质量控制。您可以在我们的网站上“Application页面”获得更多应用信息，如果您有兴趣，可以和我们一起做一个“SmartStories”，也可以联系我们。

与肽图谱相比，根据Genovis科学家的经验，尤其是对于像抗体这样的分子，许多人在常规实验中做了太多的肽图谱，而中级水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中级方法（IdeS酶切抗体）需要更少的实际操作步骤和较少的示例处理，所有这些都意味着过程中出错的事情更少。我们的许多酶可以作为平台方法，同样的方法适用于绝大多数的抗体，这不是肽图的情况下，可能需要优化整个样品制备，LC分离，质谱设置和数据分析的每个不同的抗体分析。这些变化可能是很小的，但没有一种适用于所有肽图的方法。由于分析和数据分析的简单性，中级方法非常适合自动化和高通量的工作流程。肽图当然可以自动用于样品制备，但高通量肽图生成大量数据，仍然需要彻底分析。事实上，肽图谱是一个多步骤的过程，每一个步骤都可能破坏方法，并可能导致破坏蛋白质的人工制品，很难交叉训练给非专业人员。中级水平的方法很容易交叉训练，我们的方法在质量控制实验室中被成功地使用。肽图谱是一种用于修饰分析和氨基酸确认的方法，但一旦完成了这一工作，我相信使用中级分析可以成功地更有效地完成抗体样本的大部分工作。Genovis的FabULOUS （SpeB）制备的Fab片段可用于亲和力研究、Fab糖基化研究和结构研究。

与IdeS不同，融合蛋白是通过将两种或多种蛋白质或肽的功能组合成一个量身定制的分子来创造的，以专门应对挑战。连接此类蛋白质或肽结构域的常见方法是包含柔性连接子。这些连接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸残基（G），或甘氨酸残基散布丝氨酸残基（GS）以形成重复序列。这为连接子提供了足够的灵活性，不会干扰连接蛋白质结构域的功能。然而，这些新模式带来了新的分析挑战，需要新的工具来促进表征和产品质量监测。中级分析已成为分析单克隆抗体疗法的标准方法，涉及将分子消化成几个定义的亚基。它们足够小，可以获得高质量的质谱图，并为产品质量属性提供特定领域的信息。由于G和GS连接子对常见蛋白酶的降解具有抗性，因此很难分离结构域以进行深入分析。因此，Genovis开发了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一种消化柔性富含甘氨酸的连接子的酶。GlySERIAS可以分离不同的功能域，并实现对融合蛋白、多特异性抗体和含有富含甘氨酸的连接子的各种mAb片段进行详细表征的中级方法。小鼠 IgG1 在铰链下方具有不同的序列，不被 FabRICATOR Z 消化。河北GingisREXIdeS蛋白酶抗体酶切

LC-MS中级分析用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。天津GingisREXIdeS蛋白酶抗体酶切

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）试剂盒可消化兔 IgG，但要在亲和步骤中捕获 Fc 片段，您需要另一种填料，而不是试剂盒中通常包含的 CaptureSelect™ Fc。如果您对处理兔IgG感兴趣，请联系Genovis团队，我们将在FabRICATOR Fab2试剂盒中提供与兔Fc相容的树脂色谱柱。使用FabRICATOR的抗体消化的简单性、速度和可重复性也意味着这种酶可以被用于质量控制应用。 QC方法需要执行简单，易于训练，高度可重复，数据易于分析，这正是您使用FabRICATOR所得到的。 因为它适用于一系列不同的IgG，这也意味着使用FabRICATOR进行QC工作的客户将能够在未来的产品中使用它。 这显示了这种酶在抗体消化中是多么的有效。天津GingisREXIdeS蛋白酶抗体酶切