Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱，用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体，开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化，并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来，该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普，如果不首先去除唾液酸，将很难分析，但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。在天然条件下用固定化PNGase F去除zhiliao性抗体；重庆固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖：依那西普是一种融合蛋白，由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇，使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性，制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品：（i）携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白，（ii）用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基， 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品（图1）。作为比较，SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中，以将Fc区与大多数C端糖肽分离，以促进其表征。重庆固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发由于GlycOCATCH树脂和O-糖蛋白/肽之间的强相互作用。
与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物，可快速有效地去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于减少异质性，以促进蛋白质的分析，例如质谱法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-连接聚糖的快速高效去糖基化；即用型离心柱形式 - 无酶干扰分析；与LC-MS兼容。与PNGase F类似，Genvois的与PNGase F类似，Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常见的粘蛋白型 O-糖所需的酶，即单唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 （α-GalNAc）。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分：PNGase F；O-糖苷酶。
用于水解离心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的 PNGase F 酶，用于在样品中酶峰减少的糖蛋白上水解 N-糖。 将糖蛋白样品与PNGase F一起在离心柱中固定，然后通过离心步骤轻松收集去糖基化的蛋白质。由于空间位阻，PNGase F对某些糖蛋白的活性可能缓慢或受到抑制 - 在这些情况下可能需要更长的孵育时间或糖蛋白变性。 Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3.z终样品中的酶峰减少。在变性反应条件下，PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。
Genovis的PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一种糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。该酶用于MS分析前的样品制备，以降低蛋白质异质性并实现游离的聚糖分析，并研究N-聚糖的功能作用。1. 对所有哺乳动物N-聚糖的高效水解；2.对多种糖蛋白具有活性；3.可固定在即用型离心柱产品形式；4. 自动化友好型，96孔板，用于高通量 N-糖去除。Genovis的ImpaRATOR 是一种 O-糖依赖性蛋白酶，可消化携带粘蛋白型。O-聚糖的蛋白质，包括唾液酸化物质、糖基化丝氨酸和 Thr 残基的 N-末端。该酶产生携带 O-糖的糖肽，从而实现 O-糖谱分析、位点占用测定和 O-糖肽图谱以及使用 LC-MS 分析的中级方法。1. 特异性广 - 接受多种 O-聚糖变体，包括唾液酸化物种；2. 可靠O-聚糖特异性蛋白酶 – 消化丝氨酸/苏氨酸糖基化位点的 N 末端；3. 稳健的消化，增强复杂生物制药的表征。GalactEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
用SialEXO处理血清，上样于GlycOCATCH，洗涤，洗脱O-糖基化蛋白。Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。重庆固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体：唾液酸是带负电荷的糖残基，存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化，从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. 样品中不含酶。因此，唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法，可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。重庆固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
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