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免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和纯化特定蛋白质的实验方法。
优点:
1. 特异性强:利用特异性抗体捕获目标蛋白,可以有效地从复杂的生物样本中分离出感兴趣的蛋白质。
2. 灵敏度高:可以检测到低丰度的蛋白质,包括瞬态或弱相互作用的蛋白质复合物。
3. 应用范围广:适用于多种生物样本,如细胞裂解物、组织提取物和生物流体。
4. 生物学洞察深入:能够揭示蛋白质之间的相互作用网络,有助于理解细胞内的信号传递和调控机制。
5. 可与其他技术联用:如与质谱(IP-MS)联用,可以准确鉴定蛋白质及其相互作用伙伴。
缺点:
1. 对抗体依赖性高:需要高亲和力和高特异性的抗体,抗体的质量直接影响实验结果。
2. 可能存在非特异性结合:样本中的其他蛋白质可能与抗体或固相支持物发生非特异性结合,导致背景噪音。
3. 可能影响蛋白质的天然状态:裂解和沉淀过程可能会改变蛋白质的构象和功能。
4. 实验重复性:需要多次实验来确保结果的可重复性和可靠性。
5. 样品处理:需要避免样品降解和非特异性结合,这可能需要使用蛋白酶抑制剂和适当的缓冲液条件。
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RIP技术的优势在于:
1. 特异性:利用特异性抗体,可以精确地捕获目标RNA结合蛋白及其相互作用的RNA。
2. 应用场景多:适用于研究RNA结合蛋白、miRNA、lncRNA等非编码RNA与蛋白质的相互作用。
3. 技术结合:RIP后的RNA可以用于多种下游分析,如qPCR、测序等,为研究RNA的功能和调控提供了重要信息。
RIP技术的限制包括:
1. 抗体质量:需要高质量的特异性抗体,否则可能得到假阳性或假阴性结果。
2. 非特异性结合:可能存在非特异性结合问题,需要仔细的实验设计和对照来控制。
ChIP免疫沉淀外包公司免疫沉淀技术RIP是什么?

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免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。
基本原理
免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质(抗原)之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体,可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。
免疫沉淀技术有多种类型,包括:
1. 个别免疫沉淀法(Individual IP)
2. 免疫共沉淀法(Co-IP)
3. 染色质免疫沉淀法(ChIP)
4. RNA免疫沉淀法(RIP)
近年来,免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。

免疫沉淀IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀抗体的选择?

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ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述:
1. 交联:将细胞与交联剂(如1%甲醛)孵育,通常在室温下进行10-15分钟。
2. 终止交联:添加甘氨酸以终止交联反应,孵育5分钟。
3. 收集细胞:通过离心收集细胞,并用PBS洗涤以去除交联剂。
4. 细胞裂解:使用裂解缓冲液裂解细胞,释放染色质。
5. 染色质剪切:使用超声波或酶消化将染色质剪切成适当大小的片段。
6. 免疫沉淀:将剪切后的染色质与特异性抗体孵育,然后添加蛋白A/G磁珠。
7. 洗涤:用低盐、高盐和LiCl洗涤液洗涤磁珠,去除非特异性结合物。
8. 洗脱:用洗脱缓冲液洗脱DNA。
9. 逆转交联:用蛋白酶K处理,然后在65°C下加热过夜以逆转交联。
10. DNA纯化:使用商业试剂盒或标准酚/氯仿方法纯化DNA。
11. 分析:使用qPCR分析富集的DNA,或进行测序以确定蛋白质结合位点。
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免疫沉淀技术Co-IP的原理是什么?深圳anti DYKDDDDK免疫沉淀实验原理

    免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性,将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来,初步分离靶蛋白的一种方法。免疫共沉淀(coimmunoprecipitation)是一种在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理非常简单,如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话,那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时,另一个蛋白也会被同时沉淀下来。与酵母双杂交技术不同,免疫共沉淀技术所利用的是抗原和抗体间的免疫反应,是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用的方法。 深圳anti DYKDDDDK免疫沉淀实验原理

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免疫沉淀实验是生物研究领域中一项极其重要的技术,它就像一把微观世界的钥匙,帮助我们开启探索生物分子相互作用的神秘之门。在进行免疫沉淀实验时,精心选择特异性的抗体是关键的第一步。这种抗体能够精细识别并结合目标分子,如同一位敏锐的猎人锁定猎物。然后,将抗体与含有目标分子的复杂样品混合,让抗体与目标分子充分结合,形成免疫复合物。接下来的分离步骤则需要精细的操作。通过离心或磁珠等方法,将这些免疫复合物从样品中分离出来。这一过程就像是从大海中捞针,但凭借着科学的方法和精密的仪器,我们能够成功地捕获这些珍贵的“针”。对分离得到的免疫复合物进行分析,可以揭示出目标分子与其他相关分子的相互作用。例如,通过质谱...

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