在这里，Genovis分析了 C1 抑制剂——一种人血浆衍生的生物zhiliao药物，由 6 种 N-聚糖和多达 28 种 O-聚糖修饰，主要由唾液酸he心 1 结构组成。在不对这种高度异质的蛋白质进行任何预处理的情况下，反相LC-MS分析产生了无法详细解释的复杂质谱图。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱，可在3小时内有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白质上仍残留着 1 到 3 个 N-聚糖。使用冻干的PNGase F和OmniGLYZOR试剂盒中包含的MS友好型RapiGest™ SF表面活性剂*，在变性条件下通过额外的去糖基化步骤去除这些不可接近的N-聚糖。观察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不会从变性中获益，这就是为什么OmniGLYZOR Microspin色谱柱只能在非变性条件下使用的原因。实现 O-糖谱分析、位点占用测定和 O-糖肽图谱以及使用 LC-MS 分析的中级方法。甘肃高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性，形成了重叠的肽，从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较，相同材料的标准胰蛋白酶消化物， 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位：OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽，并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。甘肃高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究使用OpeRATOR对胞生成素（EPO）进行O-糖位点特异性消化：确定中级水平的 O-糖基化位点。
G0F 抗体在 30 分钟内：半乳糖的存在会影响zhiliao性抗体引发的效应功能，为了研究抗体的作用方式，可能需要彻底去除半乳糖残留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠单抗上使用 30 分钟孵育证明。genovis的GalactEXO Immobilized 由强大的 GalactEXO 酶组成，该酶固定在琼脂糖珠上，并以易于使用的微离心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖残基。使用FabRICATOR®将抗体消化成亚基，并使用LC-MS进行分析。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变，但后者在z终制剂中没有留下酶。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解，因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解，因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。
我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化携带he心 1 O-聚糖的蛋白质，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 残基的 N 端。
SialEXO 2-3 在天然条件下水解糖蛋白，在 pH 值范围为 7.0 至 9.0 时显示出活性。该酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。该酶具有 His 标签，分子量为 66 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高用于离心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的SialEXO酶，用于糖蛋白的去唾液酸化，而不会被酶污染z终制剂。它水解天然糖蛋白上的唾液酸（α2-3、α2-6 和 α2-8）并释放出聚糖。效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。FucosEXO从一组dai表不同键的不同寡糖底物中释放的岩藻糖。FucosEXO对α1-6连接的岩藻糖残基没有活性。山西瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
与丝氨酸或苏氨酸连接的 GalNAc（称为 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解。甘肃高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
对Genovis的ImpaRATOR处理的样品的分析表明，ImpaRATOR很好地消化了所有三种底物并产生了相似的糖肽，但预期的聚糖种类不同。用ImpaRATOR处理的样品比其他样品含有更多的变异，因为每种肽都检测到多种聚糖结构。观察到的聚糖种类主要是单唾液酸化和二唾液酸化he心1结构，这与依那西普的预期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO预处理样品均产生具有裸核1结构的肽，但携带在ImpaRATOR消化样品中观察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 预处理，然后用 ImpaRATOR 消化，得到含有 Tn 抗原的肽。总之，这些数据证明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR处理的依那西普显示出与相应的去唾液酸化OpeRATOR处理样品略有不同的消化模式。例如，OpeRATOR在两个O-糖基化氨基酸之间消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱（数据未显示）。甘肃高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
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