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南京细胞培养支原体检测说明书

支原体去除试剂使用后，对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性...

支原体基本参数

品牌
世途科生物
型号
CM0001

支原体企业商机

支原体去除试剂使用后，对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体，而对真核细胞几乎没有影响。然而，某些情况下，去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响，尤其是在去除剂作用期间。此外，如果去除剂的效果不彻底，可能会导致细胞再次被支原体污染。

需要注意的是，某些支原体去除试剂可能会在去除支原体的过程中导致支原体膜溶解，从而释放出支原体的DNA，这可能会在随后的支原体核酸检测中引起假阳性结果。因此，在去除支原体后，建议在继续正常传代培养几代细胞后再进行支原体检测，以确保检测结果的准确性。

支原体检测有哪些方法？南京细胞培养支原体检测说明书

细胞培养中支原体污染的检测方法有多种，以下是一些常用的检测手段：

1. 显微镜检测：通过相差显微镜观察细胞，支原体在细胞表面和细胞之间会呈现为暗色微小颗粒。

2. 荧光染色法：使用荧光染料Hoechst 33258与DNA特异性结合，使支原体的DNA着色，然后在荧光显微镜下观察。染色后的支原体会在细胞周围或附于细胞膜表面显示为亮绿色小点。

3. 电镜检查：使用扫描电镜或透射电镜观察，这是一种简便快速的方法。

4. 聚合酶链反应（PCR）：使用特定的引物对支原体DNA进行扩增，是一种高灵敏度的检测方法。

5. 等温扩增法：基于LAMP技术，室温反应后观察颜色变化确认是否有支原体污染。

细胞支原体去除对于同一个样品，为什么PCR结果为阳性，而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性？

细胞培养中，支原体检测的重要性体现在以下几个方面：

1. 高污染发生率：支原体对培养细胞的污染发生率非常高，据估计平均发生率在60%左右。

3. 隐匿性强：支原体污染具有很高的隐匿性，早期不容易被发现，除非使用特异性和灵敏度都非常高的专业检测试剂盒。

3. 影响实验结果：支原体污染会改变细胞的生理性质，影响实验结果的准确性。细胞培养物一旦被支原体污染，会改变细胞DNA、RNA及蛋白表达，导致实验数据不准确、不稳定。

4. 难以通过肉眼或常规方法发现：支原体污染无法通过肉眼检查细胞来发现，也不能通过向培养基中加入抗*素控制。

5. 对细胞培养数据可靠性的影响：支原体污染会降低细胞系的有效性，使得细胞培养数据失去可靠性，无法为生命科学研究提供有意义的数据。

6. 预防和控制污染的必要性：定期进行支原体检测是细胞培养实验室进行自我质量监控的必要组成部分，有助于及时发现并控制污染，保证实验的准确性和重复性。

7. 避免细胞株受损：支原体污染可能导致细胞株受损，影响细胞株的质量和研究价值。及时检测和清*支原体污染有助于保护珍贵的细胞资源

细胞培养中支原体难以彻底消灭的原因主要包括以下几点：

1. 无细胞壁结构：支原体是没有细胞壁的微生物，这使得许多作用于细胞壁的抗*素对支原体无效。

2. 微小体积：支原体体积小，能够穿过常规的除菌滤膜，例如0.20微米甚至0.10微米的滤膜。

3. 隐匿性：支原体污染初期很难被察觉，它们在普通光学显微镜下几乎不可见，因此细胞被支原体污染后，前期很难被发现。

4. 传播途径多样：支原体可以通过细胞培养物、细胞悬液、细胞培养用具等途径迅速传播。

5. 污染源：支原体污染源包括细胞间的交叉污染、操作人员的口腔、皮肤，以及细胞培养用的组分如血清、培养液等。

6. 环境因素：实验室环境、试验台、超净台、培养箱等可能被支原体污染，引起细胞的污染。

7. 抗*素耐药性：支原体可能对某些抗*素产生耐药性，使得治*效果变差。

8. 检测和清理方法的局限性：一些传统的支原体检测和清理方法可能不够灵敏或有效，导致难以彻底清理支原体

细胞培养中支原体污染的后果？

支原体去除的原理通常涉及以下几个方面：

1. 抗*素作用：使用特定的抗*素制剂来抑制支原体的生长和繁殖。例如，含有喹诺酮类、四环素衍生物类和大环内酯类抗*素的混合制剂，这些抗*素能够抑制支原体的DNA和蛋白合成。

2. 破坏细胞膜：支原体去除剂中的抑菌肽（AMPs）成分通过破坏支原体细胞膜的完整性，导致支原体细胞死亡。

3. 抑制DNA复制：支原体去除剂通过抑制支原体DNA回旋酶活性，有效抑制支原体DNA的复制，从遗传物质着手彻底杀灭支原体。

4. 协同作用：某些支原体去除剂利用抑菌肽（AMPs）和穿膜肽（CPPs）的协同作用来除去支原体，穿膜肽能够帮助抑菌肽更有效地穿透细胞膜，增强其杀灭支原体的能力。

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支原体去除试剂在清*支原体的过程中可能会对细胞的生长状态产生一定的影响。支原体去除试剂是一种非抗*素类试剂，它通过与支原体膜特异性结合，改变支原体膜的通透性，从而导致支原体破裂死亡。尽管该产品在作用期间可能会对细胞的活力和形态有一定的影响，但由于它不能穿过真核细胞的细胞膜，因此不会改变细胞的任何特性。支原体被清*后，细胞在后续的传代过程中能快速恢复其正常的生长和增殖状态，细胞后续的生长增殖几乎无影响。

此外，该产品不含抗*素，不会使支原体发生耐药反应，细胞毒性小。然而，需要注意的是，不同细胞对支原体去除试剂的耐受程度有所差异，可以根据实验结果适当调整细胞量和处理条件。在某些情况下，如果出现细胞变形、生长缓慢等现象，可以更换成标准培养液终止作用，或者调整去除试剂的使用浓度和作用时间。

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