Co-IP的实验步骤:
1. 细胞裂解:首先,细胞或组织被裂解,释放其中的蛋白质。
2. 抗体结合:然后,将特异性抗体(针对已知蛋白质之一的抗体)加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白(诱饵蛋白)上。
3. 免疫复合物形成:抗体与目标蛋白结合后,形成免疫复合物。
4. 沉淀:接着,使用蛋白A或蛋白G结合的珠子(如琼脂糖或磁性珠子)来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合,从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。
5. 洗涤:捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。
6. 洗脱和分析:免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析,如Western blot(WB)或质谱分析,以鉴定相互作用的蛋白质。
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免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。
RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可以通过分离纯化,对这些复合物中的RNA进行检测,如qPCR验证或测序分析。
表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注增加。RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA潜能的这一新认识带动了新方法的发展,使研究人员能够定位 RNA-蛋白质相互作用。
蛋白免疫沉淀磁珠现货免疫沉淀纯化所得抗原纯度低是什么原因?
免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀RIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀技术是什么?
Co-IP的优势:
1. 生理相关性:Co-IP可以在接近生理条件的条件下捕获蛋白质相互作用。
2. 特异性:使用特异性抗体可以提高实验的特异性。
3. 广泛应用:Co-IP技术适用于多种样本类型,包括细胞培养、组织样本等。
Co-IP的局限性:
1. 抗体依赖性:需要高质量的特异性抗体,否则可能得到假阳性或假阴性结果。
2. 非特异性结合:可能存在非特异性结合问题,需要仔细的实验设计和对照来控制。
3. 技术挑战:对于低丰度或弱相互作用的蛋白质,Co-IP可能面临技术挑战。
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免疫沉淀技术的实验方法。上海ChIP免疫沉淀磁珠货期
Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其应用场景如下:
1. 蛋白质相互作用网络的鉴定:Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络,发现目标蛋白的结合伙伴。
2. 信号传导途径的研究:通过Co-IP技术,科学家们发现了许多关键的细胞信号通路,如MAPK和PI3K/Akt通路等,为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。
3. 药物靶点筛选:利用Co-IP技术,研究人员可以筛选潜在的药物靶点。
疾病机制研究:通过分析疾病相关蛋白质的相互作用,Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。
4. 抗体药物开发:Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性,评估抗体药物的亲和力和特异性。
5. 转录因子研究:Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用,进而揭示基因调控网络。
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