Human Cell Design 开发了创新且安全的人类β细胞系生产方法。首先，将每个转导的人类胎儿胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的肾被膜下，因为该部位是人类胰腺发育的允许部位。在 6 到 8 个月内，所有移植的小鼠都发生了原发性胰岛素瘤，这导致它们的血糖水平下降。与其他胰腺移植相比，原发性胰岛素瘤是高度血管化的。然后将原发性胰岛素瘤中这些高度血管化的区域分离，用在大鼠胰岛素启动子控制下表达 hTERT 的慢病毒进行转导，并移植到其他 SCID 小鼠中。这些小鼠在 2 至 3 个月内出现低血糖，胰岛素阳性细胞大量扩增。这种体内扩增有助于维持大量增殖的胰岛素细胞，并允许定义允许的培养条件，在这种条件下，可以在体外建立永生化细胞系。Human Cell Design（HCD）开发了一种用于在人类胎儿组织中使用靶向Zhong Liu产生功能的人类β细胞系。在胰岛素启动子的控制下，用表达 SV40LT 的慢病毒载体转导人类胎儿胰腺芽。Human cell design为客户提供多种胰岛B细胞类型的操作手册。人胎儿胰腺外植体糖尿病细胞模型流氏分析和免疫荧光分析
表达HLA-A2的EndoC-βH5-HLA-A2系是通过每105细胞使用100ngp24衣壳蛋白与pTRIPDU3CMVHLA-A2IRESPURO慢病毒转导EndoC-βH5来产生的。在1mg/ml嘌呤霉素存在下将细胞扩增三周以选择转导的细胞。为了完全成熟，将EndoC-βH5和EndoC-βH5-HLA-A2细胞再培养3周，并用5mM他莫昔芬和0.5mM更昔洛韦处理，以切除永生化基因并选择切除的细胞。使用胰蛋白酶（25300e054）收集所得细胞，表达EndoC-βH5细胞的修饰HLA-A2引发同种异体反应性T淋巴细胞ji huo，概括了1型糖尿病中涉及的一些自身免疫机制。江苏糖尿病细胞模型全球200+学术与制药实验室测试和批准糖尿病细胞模型——即用型 EndoC-BH5 细胞是第三代永生化人类胰腺 B 细胞系。
人原代β细胞的可用性有限，从人胰岛制剂中纯化β细胞具有挑战性。在啮齿类动物中，β细胞系自 20 世纪 70 年代初以来就已经可用，并且在研究β细胞功能方面非常有用。然而，啮齿动物的β细胞并不是研究人类β细胞的理想选择，因为人类和啮齿动物的β细胞在许多方面彼此不同。例如，在啮齿类动物中，胰岛素由 2 个基因编码，而在人类中，只有 1 个基因编码。啮齿动物和人类β细胞的功能差异是由于葡萄糖转运和磷酸化在葡萄糖感知中的相对作用不同。
Humancelldesign构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3,EndoC-βH5,GLTxEndoC-βH5,HLA-A2EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。通过多轮次优化改良，获得的功能胰腺B细胞，无限接近天然人源胰岛B细胞，其胰岛素分泌功能与天然细胞类似，基于PDX1/NKX6.1关键基因验证的细胞均一性达到90%以上，在2.8mMand11mM葡萄糖剂量下表现出10倍的胰岛素分泌反应，对GLP-1R激动剂，Exendin4刺激产生明显增强，且可实现批量化生成，实现稳定供应。此外Humancelldesign开发系列人源胰岛B细胞模型EndoC-BH5的同时，开发了配套的细胞培养试剂，可用于细胞培养和后续相关实验。全球200+学术与制药实验室测试和批准了Huamn cell design(HCD)的糖尿病细胞模型。
HCD利用人胎儿胰腺组织中的靶向Zhong Liu发生开发了永生化人β细胞系，其中使用慢病毒载体整合了两个转基因，SV40大T抗原(SV40-LT)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)两种转基因均在β细胞特异性大鼠胰岛素启动子(RIP)的控制下表达。***代细胞，名为EndoC-βH1，以组成型方式表达SV40LT和hTERT，而在第二代EndoC-βH2和EndoC-βH3中，这些转基因可在loxP介导的CRE重组后被切除，位点位于慢病毒骨架的3'LTR。EndoC-βH5细胞是通过使用表达可切除的SV40LT和hTERT的慢病毒载体对人胎儿胰腺进行靶向Zhong Liu发生而获得的。糖尿病细胞模型安全创新，已经进行了流氏分析和免疫荧光分析、RNA-seq等功能验证。EndoC-BH1糖尿病细胞模型开展葡萄糖脂毒性研究
糖尿病细胞模型EndoC-BH5 细胞以 1e2 105 细胞/孔接种到 BCoat包被的8 孔 IBIDI 室载玻片上。人胎儿胰腺外植体糖尿病细胞模型流氏分析和免疫荧光分析
EndoC-βH1使用慢病毒介导的基因转移从人类胎儿胰腺中产生功能性β细胞，这些胰腺处于发育的早期阶段，即9至11周，这段时间与β细胞分化的开始相吻合(33)。整合的转基因SV40LT受大鼠胰岛素启动子控制，在胰岛素阳性细胞中特异性表达。通过使用这种靶向方法，SV40LT在新形成的β细胞中表达，同时这些细胞头次产生胰岛素。因此，我们成功地模仿了用于产生功能性啮齿动物β细胞系的转基因方法(7,8,34)，用于从人胎儿胰腺中开发功能性人β细胞系。人胎儿胰腺外植体糖尿病细胞模型流氏分析和免疫荧光分析
Human Cell Design 以其技术和创新能力，在人源细胞模型领域树立了榜样。其开发的人源胰...
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