EndoC-βH5细胞是一种新型人类胰腺β细胞解决方案,可用于开发人类糖尿病模型以及药物筛选和验证平台,产生流程为:DNA构建,慢病毒载体产生,人胎儿胰腺外植体与pTRIPDU3loxP-pY-TK-RIP405-SV40-LT和pTRIPDU3loxPpY-TK-RIP405-hTERT慢病毒载体共转导,移植到SCID小鼠的肾囊下,导致八个月后形成胰岛素瘤,从而获得EndoC-βH5。EndoC-βH1和增殖的EndoC-βH5细胞分别在Opti-β1和Ulti-b1培养基中的βCoat涂层塑料板上培养。使用胰蛋白酶(0.05%)每7天繁殖一次细胞。流式细胞术分析表明所有EndoC-βH5细胞均呈胰岛素阳性,并且在绝大多数细胞中检测到PDX1和NK6.1表达(分别为92.3%和90%)。EndoC-βH5细胞在涂层塑料上形成小的贴壁簇。糖尿病细胞模型EndoC-BH5 细胞表现出动态胰岛素分泌以及对肠促胰岛素的强烈且剂量依赖性反应。山东糖尿病细胞模型无菌环境操作
人源胰岛 B 细胞模型对于与胰岛相关的代谢疾病研究,包括糖尿病、糖尿病炎症、针对 GLP-1R 的 Exendin-4 等类似药物开发有重要作用。通过干细胞诱导 B 细胞产生的胰岛 B 细胞存在纯度较低,缺乏成熟胰岛 B 细胞功能等问题。通过捐赠组织的胰腺 B 细胞提取,存在供应量较低,明显批次效应,耗时较长等问题。使用糖尿病动物模型进行研究会比糖尿病细胞模型成本更高昂,周期更长。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。通过多轮次优化改良,获得的功能胰腺B细胞,无限接近天然人源胰岛B细胞,其胰岛素分泌功能与天然细胞类似,基于PDX1/NKX6.1关键基因验证的细胞均一性达到90%以上(左图),在2.8 mM and 11 mM葡萄糖剂量下表现出10倍的胰岛素分泌反应(右图),对GLP-1R激动剂, Exendin4刺激产生明细那反馈, 且可实现批量化生成,实现稳定供应。II型糖尿病糖尿病细胞模型操作手册糖尿病细胞模型——即用型 EndoC-BH5 细胞是第三代永生化人类胰腺 B 细胞系。
葡萄糖脂毒性研究:胰岛 β 细胞鉴定标志物,胰岛 β 细胞功能性标志物,胰岛 β 细胞糖脂化合物研究。筛选胰岛素分泌促进药物:促胰岛素分泌药物筛选,功能机制研究,干细胞zhi liao糖尿病参照对比。基于高通量筛选的 siRNA 靶标验证和筛选:高通量胰岛 β 细胞靶点鉴定和筛选,糖尿病疾病模型构建,促胰岛素分泌药物筛选。干细胞zhi liao糖尿病:参照对比。Human Cell Design 开发了创新且安全的人类β细胞系生产方法。首先,将每个转导的人类胎儿胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的肾被膜下,因为该部位是人类胰腺发育的允许部位。在 6 到 8 个月内,所有移植的小鼠都发生了原发性胰岛素瘤,这导致它们的血糖水平下降。与其他胰腺移植相比,原发性胰岛素瘤是高度血管化的。然后将原发性胰岛素瘤中这些高度血管化的区域分离,用在大鼠胰岛素启动子控制下表达 hTERT 的慢病毒进行转导,并移植到其他 SCID 小鼠中
在EndoC-βH5细胞中检测到所有对β细胞身份和功能重要的转录因子的表达。与成人b细胞相比,EndoC-βH5细胞中的表达水平相似(FOXA2、MNX1、NKX2.2)或更高(HOPX、MAFB、NEUROD1、PAX6、PDX1)。GLIS3、NKX6.1和MAFA在EndoC-βH5细胞中以较低水平表达EndoC-βH5细胞中表达与胰岛素分泌相关的受体,包括肾上腺素(ADRA2A)、脂肪酸(FFAR1、FFAR3)、GABA(GABRB3)、胰hao xue tang素(GCGR)、生长抑素(SSTR2)和肠jiang xue tang素受体,例如胰gao xue tang素样受体肽-1(GLP1R)和胃抑制多肽(GIPR)。重要的是,EndoC-βH5细胞中的GLP1R、GIPR和GCGR比EndoC-bH1细胞中更丰富。与 EndoC-BH1 细胞相比,EndoC-BH5 细胞与原代人 B 细胞更接近。
然后将转导的芽移植到SCID小鼠体内,使其发育成成熟的胰腺组织。分化后,新形成的表达sv40lt的β细胞增殖并形成胰岛素瘤。然后用人端粒酶逆转录酶(hTERT)转导β细胞,移植到其他SCID小鼠体内,在体外扩增生成细胞系。其中一种细胞系,EndoC-βH1,表达了许多β细胞特异性标记,而没有任何其他胰腺细胞类型标记的实质性表达。在葡萄糖或其他胰岛素分泌剂的刺激下,细胞分泌胰岛素,细胞移植逆转了化学诱导的小鼠糖尿病。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。糖尿病细胞模型EndoC-BH5 细胞作为模型来在基因组筛选中鉴定胰岛素分泌调节剂。GLTx糖尿病细胞模型操作指南
糖尿病细胞模型可用于类胰岛构建、糖尿病细胞模型构建。山东糖尿病细胞模型无菌环境操作
HumanCellDesign(HCD)是专门从事人源胰岛β细胞系构建和开发的公司。人源胰岛β细胞模型构建技术性文章早期发表于2011年,相关文章总引用量达到600+,人源胰岛β细胞模型已经被全球200多家生物医药和生命科研机构作为糖尿病细胞模型使用。HCD较具代表性的细胞系有EndoC-BH1,EndoC-BH3,EndoC-BH5,GLTxEndoC-BH5,HLA-A2EndoC-BH5等,细胞系可作为糖尿病细胞模型和糖尿病替代细胞zhi liao模型使用。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。山东糖尿病细胞模型无菌环境操作
在胰岛细胞刺激中,基础和高D-葡萄糖条件之间的刺激指数为11.6±1.8。通过应用不引起胰岛素分泌的...
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