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免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀(IP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。
1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。
2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。
3. 抗体类型:单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性,而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。
4. 应用验证:选择已经过免疫沉淀(IP)或相关应用(如Western blot, IHC)验证的抗体,这增加了实验成功的可能性。
5. 供应商信息:选择信誉良好的抗体供应商,并查看供应商提供的技术数据和客户评价,以帮助做出决策。
免疫沉淀Co-IP技术选琼脂糖珠还是磁珠?上海ChIP免疫沉淀磁珠价格

Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其实验设计如下:
1. 样品准备:Co-IP实验通常有两种,一种是内源性蛋白相互作用验证,一种是非内源性蛋白相互作用验证。内源性相互作用通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达;非内源性相互作用则是将含有靶蛋白的组织进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液。
2. 沉淀诱饵蛋白:利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白。在样品中加入磁珠偶联抗体,抗体会与诱饵蛋白结合,利用磁铁将磁珠拉下,同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。
3. SDS-PAGE及WB检测:得到沉淀后,需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离,随后利用WB检测是否存在靶蛋白。
4. 实验对照设置:为了避免“假阳性”,需要设置正确的对照,包括阴性对照和阳性对照(Input组)。Input组为直接利用抗体对细胞裂解液进行WB检测,验证细胞裂解液中存在蛋白。
5. 结果真实性:确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白。使用单克隆抗体有助于避免污染的发生。
广州RIP免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠免疫沉淀技术Co-IP的实验设计。

真核生物的基因组 DNA 以染色质(Chromatin)的形式存在。因此,研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径,而染色质免疫共沉淀(Chromatinimmunoprecipitation,ChIP)技术是目前公认的研究此相互作用的选择,是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下,固定蛋白质-DNA(染色质)复合物,并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法(抗体亲和)沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的 DNA,通过对目的片段的纯化与后期检测,从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。

胞内的移动轨迹,并分析与之相互作用的伴侣分子,从而揭示蛋白质的转运机制和调控因素。对于膜蛋白的研究,免疫沉淀面临着特殊的挑战,但也带来了独特的解决方案。膜蛋白由于其特殊的结构和环境,难以直接进行研究。然而,通过巧妙设计的免疫沉淀实验,结合去垢剂处理和特殊的缓冲条件,可以有效地沉淀膜蛋白,并研究其与胞质蛋白的相互作用,为理解膜蛋白的功能和信号传导机制提供了有力手段。此外,免疫沉淀在研究蛋白质的同源或异源多聚体形成方面具有重要价值。许多蛋白质通过形成多聚体来发挥功能,通过免疫沉淀特定的单体蛋白,可以同时沉淀与其结合的其他同源或异源亚基,进而解析多聚体的组成和结构,为深入理解蛋白质的协同作用和功能调节提供直接证据。免疫沉淀技术Co-IP的实验方法。

免疫沉淀实验不同于WB实验的样品制备,对实验样品制备要求更高,除了要控制所有操作尽量在冰上完成外,关键的是裂解液的成分,裂解液成分直接决定了样品质量。
主要影响:
1. 蛋白的释放:许多目的蛋白定位在细胞器,质膜,细胞核,细胞骨架中,但通常这些亚细胞结构很难被裂解液有效溶解,所以很难将这些蛋白释放出来。
2. 蛋白相互作用:不同去垢剂对不同性质的蛋白质间相互作用影响程度不同,一些互作较弱的蛋白对尽管在比较温和的裂解液配方中仍然会被破坏。
免疫沉淀ChIP技术选琼脂糖珠还是磁珠?南京ChIP免疫沉淀实验视频

免疫沉淀技术ChIP的优缺点是什么?上海ChIP免疫沉淀磁珠价格

RNA免疫沉淀技术(RIP)是一种研究RNA与蛋白质相互作用的重要方法,其应用领域主要包括:
1. 转录后调控研究:RIP技术可以帮助研究者了解RNA在转录后水平如何被调控。
2. 表观遗传调控:RIP技术用于研究RNA结合蛋白(RBPs)在表观遗传调控中的作用。
3. 非编码RNA功能研究:RIP技术可以用来研究长非编码RNA(lncRNA)、miRNA和其他小RNA的种类,以及它们如何与蛋白质相互作用来调控基因表达。
4. RNA病毒研究:RIP技术也可用于研究RNA病毒与其宿主细胞内蛋白质的相互作用,进而了解病毒复制和致病机制。
5. RNA修饰和甲基化研究:RIP技术结合其他技术如m5C-RIP-seq,可用于研究RNA甲基化修饰及其在病理过程中的作用。
6. RNA定位和稳定性:通过RIP技术,研究者可以探索特定RNA在细胞内的定位以及它们如何被稳定或降解。
7. RNA-蛋白质复合物的鉴定:RIP技术可以用来鉴定与特定RNA结合的蛋白质,从而揭示RNA-蛋白质复合物的组成。
8. 疾病相关RNA研究:RIP技术在疾病相关RNA的研究中也有应用。
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