检测新鲜培养基是否有支原体污染,可以采用以下五种方案:
1. 培养法:这是一种传统且可靠的方法,通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上,观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时,但成本较低。
2. 荧光染色法:使用特定的荧光染料(如Hoechst 33258)对细胞进行染色,然后在荧光显微镜下观察。如果存在支原体污染,可以看到细胞表面或细胞间隙中支原体DNA的荧光染色。
3. PCR法:通过设计针对支原体特定序列的引物,利用PCR技术特异性扩增目标DNA。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测,如果出现条带则表明存在支原体污染。
4. 电镜观察法:使用电子显微镜直接观察培养细胞中的支原体污染情况。这种方法可以提供直观的支原体形态信息,但设备要求较高。
5. 一步法恒温支原体检测:使用特定的试剂盒,如Yeasen一步法恒温支原体检测试剂,采用等温扩增技术,通过颜色变化(由蓝紫色变为天蓝色)进行快速检测。
细胞培养为什么建议使用支原体检测?温州支原体去除试剂现货
细胞培养中建议使用支原体检测的原因主要有以下几点:
1. 支原体污染率高:常规细胞培养中支原体污染率保守估计在15-35%之间。
2. 影响实验结果:支原体污染会严重干扰实验结果的可信度,影响培养细胞的形态和生理特征。
3. 难以用光学显微镜检测:支原体是极小的细菌,其细胞膜周围没有细胞壁,无法用光学显微镜检测到。
4. 难以消灭:支原体能够迅速渗透整个实验室,一旦污染很难彻底消灭。
5. 影响产品质量:支原体污染会影响细胞培养产物的质量,监管机构推荐检测所有细胞培养产物中是否存在支原体。
6. 保证实验准确性:定期进行支原体检测和去除,确保无支原体存在细胞培养体系内,才能获得准确的实验结果。
南京细胞支原体检测试剂货期支原体检测PCR法和LAMP方法的优劣势比较。
支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响:
01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失:支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失
07/ 实验结果的不可靠性
08/ 生物安全问题
支原体是细胞外生存的 小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝形、分枝状等多种态。
1、支原体存在于我们周围,他可能就如尘埃一样存在于我们的环境中
2、可透过一般的滤膜,所以不要寄希望于过滤可以清楚支原体污染的液体
支原体对培养细胞的污染发生率高,据估计平均发生率在60%左右。同时又非常隐秘,早期不容易被发现,除非用特异性和灵敏度都非常高的检测试剂盒。支原体因为个头小,能穿过0.22微米滤器,并且在实验室内会潜在的扩散。支原体污染使得用被污染的细胞样本做的实验完全失去意义和价值。
支原体检测方法qPCR法的应用。
根据提供的信息,支原体去除试剂是一种混合制剂,通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果,同时对细胞无伤害。它被设计为对细胞毒性小,不影响后续的细胞实验,包括细胞活力检测和细胞转染等。这表明使用支原体去除试剂去除支原体后,理论上不应该对细胞的转染效率产生负面影响。
此外,支原体污染本身会对细胞的转染效率产生负面影响。研究表明,与未污染的细胞相比,支原体污染的细胞转染后具有较低的基因表达水平。因此,去除支原体后,可以预期细胞的转染效率会得到改善,因为移除了影响细胞正常功能的污染物。
支原体检测的样本用什么合适?广州支原体检测试剂
什么样的客户需要定期检测支原体污染?温州支原体去除试剂现货
对于同一个样品,如果一步法恒温试剂盒检测结果为阳性,而PCR检测为阴性,可能的原因包括:
1. 检测的支原体种类不同:一步法恒温试剂盒可能检测的支原体种类更多,例如可以涵盖27种支原体,而PCR检测可能只针对常见的12种支原体进行检测。因此,如果样品中污染的支原体种类不在PCR检测的范围内,就可能出现一步法检测为阳性而PCR检测为阴性的情况。
2. 灵敏度的差异:PCR方法的灵敏度可能高于一步法恒温检测法。PCR可以检测到低至单个拷贝的支原体,而一步法恒温检测可能需要更高的支原体拷贝数,例如10^3^个拷贝。如果样品中支原体的数量低于一步法检测的灵敏度阈值,PCR检测可能无法检测到,导致阴性结果。
3. 样品中可能含有抑制PCR反应的物质:如果样品中存在PCR反应的抑制物,可能会影响PCR的扩增效率,导致即使存在支原体,PCR检测也可能呈现阴性结果。
4. 试剂盒的特异性和交叉反应:一步法恒温试剂盒可能具有更高的特异性,减少了与其他微生物的交叉反应,从而在PCR检测为阴性时仍能准确检测到支原体的存在。
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