第五代化学发光均相发光技术

在分子诊断领域，均相发光技术的应用远不止于基础的实时荧光定量PCR（qPCR）。它正推动该领域向着更高灵敏度、更强特异性和更便捷的操作模式演进。例如，在数字PCR（dPCR）这一定量技术中，虽然目前主流依赖荧光检测，但基于化学发光的均相检测方案正在探索中。其设想是将PCR反应体系分割成数万个微滴后，利用化学发光探针（如基于鲁米诺或吖啶酯的体系）进行检测：在扩增阳性微滴中，探针被切割或构象改变触发化学发光反应，通过计数发光的微滴数目即可实现核酸分子的定量。这种方法可能免除对复杂激发光学系统的依赖，并有望利用某些化学发光体系更高的信噪比特性，进一步提升对极低丰度靶标的检出能力。均相化学发光在全球体外诊断市场的竞争态势如何？第五代化学发光均相发光技术

均相发光技术也普遍用于细胞水平的分析，如细胞活力、凋亡和化合物毒性筛选。例如，基于ATP含量的细胞活力检测：活细胞含有丰富的ATP，细胞裂解后释放的ATP可与荧光素酶反应产生化学发光，发光强度与活细胞数量成正比。整个过程在同一个孔中加入裂解/检测试剂即可完成，是均相操作的典范。对于细胞凋亡，可通过检测caspase酶活性（使用荧光底物或发光底物）来实现均相分析。细胞毒性检测则可测量因细胞膜损伤而释放的胞内酶（如乳酸脱氢酶LDH）活性，通过偶联的发光反应来定量。这些方法实现了对细胞状态的快速、高通量、自动化评估。河南均相化学发光均相发光技术告别磁珠反应，均相化学发光，操作更简便，实验效率大幅提升！

热迁移分析（CETSA）用于研究药物在细胞或组织水平与靶蛋白的结合，传统方法依赖Western Blot，通量低。与均相化学发光免疫检测（特别是Alpha技术）结合形成的CETSA HT，实现了高通量化。细胞经药物处理和不同温度加热后裂解，针对目标蛋白的特异性抗体对（分别偶联Alpha供体珠和受体珠）被加入裂解液。只有未因热变性而沉淀的、保持天然构象的蛋白才能被两个抗体同时识别并拉近微珠产生信号。通过绘制药物处理组与对照组的热稳定性曲线，可以直观看到药物结合引起的蛋白热稳定性偏移（Tm变化），从而确认靶点结合并评估结合强度，广泛应用于早期药物发现中的靶点确证。

在传染病诊断领域，均相发光技术主要用于抗原或抗体的高灵敏检测。例如，利用TR-FRET原理，可以设计检测病毒抗原的均相免疫分析。将针对病毒抗原不同表位的两种抗体分别标记供体和受体，样本中若存在病毒抗原，则形成免疫复合物并产生FRET信号。该方法快速，可用于病原体筛查。在病毒学研究中，均相发光可用于评估病毒进入（如基于荧光素酶的报告病毒）、病毒复制或抗病毒药物的效果。其高通量特性有助于快速筛选广谱抗病毒化合物。告别繁琐操作，均相化学发光来了！

GPCR是比较大的药物靶点家族，其功能研究涉及配体结合、第二信使产生、下游信号通路活化等多个层面。均相发光技术多方面渗透于此领域。对于配体结合竞争实验，可采用TR-FRET，将受体标记供体，配体标记受体。对于GPCR活化后比较关键的cAMP积累或IP3/DAG产生，均有成熟的均相检测试剂盒。例如，cAMP检测常采用基于抗体竞争原理的均相发光免疫分析。细胞裂解后，内源性cAMP与加入的标记cAMP竞争结合有限量的抗cAMP抗体。抗体结合事件通过FRET或Alpha技术被检测，信号强度与内源性cAMP浓度成反比。这类方法直接在细胞裂解液中进行，快速、灵敏，完美契合GPCR激动剂/拮抗剂的高通量筛选。体外诊断行业新星，均相化学发光，助力企业快速发展！浦光生物均相发光与普通发光的区别

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相较于荧光或比色法，化学发光作为均相检测的信号系统具有多重独特优势。首先，它无需外部激发光源，从而完全避免了光源不稳定、样本自发荧光及光散射所带来的背景干扰，理论上能获得极高的信噪比和灵敏度。其次，化学发光反应产生的光子信号强度在一定范围内与反应物浓度直接相关，动态范围宽，可跨越数个数量级。再者，化学发光体系（如鲁米诺、吖啶酯）的反应动力学多样，可满足从快速闪光到持久辉光的不同检测需求。比较后，化学发光反应的启动通常由单一试剂（如过氧化氢、碱）触发，易于控制，非常适合自动化仪器上的顺序注射和即时读数。这些特性使其成为实现超灵敏、高稳健性均相检测的理想信号输出模式。第五代化学发光均相发光技术