免疫组化的发展路程？在临床病理诊断中，免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断cancer、cancer分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及cancer形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥比较大的辅助作用。如果您有免疫组化相关的实验，可以与我们英瀚斯生物进行联系。免疫组化检测经验总结！甘肃细胞免疫组化实验
免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？
1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索比较好浓度。
2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是比较好的时间和次数。若不行，还可高压修复。
3、组织切片本身这种抗原含量低。
4、血清封闭时间过长。
5、DAB孵育时间过短。
6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。
7、开始做免疫组化，建议一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等问题。 云南做得好的免疫组化可以做什么免疫组化可以看什么？
免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？
（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。
（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。
（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。
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免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色？
（1）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。
（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。
（3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；
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（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；
（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等；
（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；
（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。 常见的免疫组化方法有哪些？
免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性，无阳性信号，假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当，根据不同的抗原特点采用不同的修复方法，大多数抗体要求热修复，热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化，如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊，进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照，比较两者染色结果。若阳性对照有表达，表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达，则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题，应逐一查找原因。有没有能做免疫组化的实验外包公司？效果好一点的。山西免疫组化检测
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实验失败常见问题分析有哪些：
为什么在显微镜下观察发现所有的切片都成阴性？
答：这种现象主要是由操作不当导致，可能的原因有：1.染色操作不当，致使染色失败；2.漏加一种抗体或者制备出的抗体没有活性；3.缓冲液中有叠氮化钠，抑制了酶的活性；4.复染或脱水剂使用不当等。建议逐一排查，找到原因后重新进行实验。
在显微镜下观察发现所有的切片都成阳性，这是为什么？答：与上一个问题类似，出现的原因也是试验操作存在问题，可能的原因有：1.切片在染色过程中抗体过浓，或者干片了；使用的呈色底物溶液已变色或呈色反应时间过长；3.抗体温育的时间过长等。
在显微镜下观察发现切片的背景很深，这是为什么？答：以下几方面会导致切片的背景过深：1.蛋白质封闭不够或所用血清溶血，造成抗体的非特异性反应；2.内源性过氧化酶没有完全阻断，显色过程中过氧化酶与酶底物反应，造成背景；3.底物呈色反应时间过长或呈色反应后漂洗不彻底。 甘肃细胞免疫组化实验
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