生物扫描电镜检测

扫描电镜操作基本步骤 1 、取材 扫描电镜下观察的样品尺寸要求比较宽松，一般1cm3左右样品都能适合大多数扫描电镜观察。 2 、固定 铺片培养的细胞取出浸入 PBS 中，漂洗细胞表面。然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中，加 4 ℃ 预冷的 3% 戊二醛，在 4 ℃ 固定 2h 或过夜，吸出固定剂，用 PBS 浸洗 2 次，每次 10min ，再用 4 ℃ 预冷的 1% 锇酸。在 4 ℃ 固定 1h ，然后用 PBS 浸洗 2 次，每次 10min 。 3 、脱水 acetone / 醋酸异戊酯( 1 ： 1 )脱水 10min ，接下来醋酸异戊酯脱水 30min ，或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脱水，每种浓度酒精通过 2 次，每次 15min 。 扫描电镜生物样品：蛋白、细胞及DNA等样品，请提供详细的制样过程，减少盐对测试结果的影响。生物扫描电镜检测

扫描电镜由电子器发射出来的电子束，在加速电压的作用下，经过磁透镜系统汇聚，形成直径为5nm，经过二至三个电磁透镜所组成的电子光学系统，电子束会聚成一个细的电子束聚焦在样品表面。在末级透镜上边装有扫描线圈，在它的作用下使电子束在样品表面扫描。 由于高能电子束与样品物质的交互作用，结果产生了各种信息：二次电子、背反射电子、吸收电子、X射线、俄歇电子、阴极发光和透射电子等。这些信号被相应的接收器接收，经放大后送到显像管的栅极上，调制显像管的亮度。由于经过扫描线圈上的电流是与显像管相应的亮度一一对应，也就是说，电子束打到样品上一点时，在显像管荧光屏上就出现一个亮点。 扫描电镜就是这样采用逐点成像的方法，把样品表面不同的特征，按顺序，成比例地转换为视频信号，完成一帧图像，从而使我们在荧光屏上观察到样品表面的各种特征图像。江苏推荐的扫描电镜拍照扫描电镜就找英瀚斯！

扫描电镜样本干燥 以临界干燥法较为理想，但必须要有专门的仪器临界点干燥器。当实验室不具备此种仪器时，可采用冰冻干燥法和乙腈干燥法。乙腈干燥法的关键是乙腈置换。样品经上述处理后，浸入 520% 的乙腈溶液中，然后依次更换 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% 的乙腈溶液，每次浸泡 15-20min ，较为后再换 100% 乙腈。然后进行真空干燥。即将乙腈置换后的样品连同青霉素瓶一起放到真空镀膜台的真空装置内，抽低真空，一般需 30-50min 。样品干燥后，待其温度升至室温时再放气，取出样品。 使用扫描电镜观察细胞样品的制备方法 5 、样品导电处理 用真空喷镀法。所用的仪器为真空喷镀仪，样品被安置在离蒸发源约 10-15cm 处的样品台上，样品进行旋转活动，先喷碳。后喷金，喷镀应均匀，完成后镜下观察。

扫描电镜检测块状试样制备 导电性材料：主要是指金属，一些矿物和半导体材料也具有一定的导电性。这类材料的试样制备较为为简单。只要使试样大小不得超过仪器规定（如试样直径较为大为φ25mm，较为厚不超过20mm等），然后用双面胶带粘在载物盘，再用导电银浆连通试样与载物盘（以确保导电良好），等银浆干了（一般用台灯近距离照射10分钟，如果银浆没干透的话，在蒸金抽真空时将会不断挥发出气体，使得抽真空过程变慢）之后就可放到扫描电镜中直接进行观察。 非导电性材料：试样的制备也比较简单，基本可以像导电性块状材料试样的制备一样，但是要注意的是在涂导电银浆的时候一定要从载物盘一直连到块状材料试样的上表面，因为观察时候电子束是直接照射在试样的上表面的。通常所说的扫描电镜像指的就是二次电子像，它是研究样品表面形貌的有用的电子信号。

扫描电子显微镜电子器发射出的电子束经过聚焦后汇聚成点光源；点光源在加速电压下形成高能电子束；高能电子束经由两个电磁透镜被聚焦成直径微小的光点，在透过较为后一级带有扫描线圈的电磁透镜后，电子束以光栅状扫描的方式逐点轰击到样品表面，同时激发出不同深度的电子信号。此时，电子信号会被样品上方不同信号接收器的探头接收，通过放大器同步传送到电脑显示屏，形成实时成像记录（图a）。由入射电子轰击样品表面激发出来的电子信号有：俄歇电子（Au E）、二次电子（SE）、背散射电子（BSE）、X射线（特征X射线、连续X射线）、阴极荧光（CL）、吸收电子（AE）和透射电子（图b）。每种电子信号的用途因作用深度而异。1940年英国剑桥大学初次试制成功扫描电镜。浙江细胞扫描电镜检测

扫描电镜可得到有关物质微观形貌的信息；对x射线的采集，可得到物质化学成分的信息。生物扫描电镜检测

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