海洋生物外泌体PKH67

寻找肝脏疾病的新型分子标志物一直是研究热点，也是难点。不同肝脏疾病中，细胞分泌的外泌体所携带的核酸和蛋白组分之间存在差异。这些不同生理状态下外泌体所携带的特异性蛋白分子、miRNA等，是潜在的分子诊断和预后标志物。肝细胞患者中，血清外泌体miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明显上升，miR-101、-106b、-122和miR-195明显下降。而HCC患者肝移植复发后，血清外泌体miR-718水平明显下降。除外泌体外，微泡也有可能作为新型标志物，研究发现HCV患病者中CD4+和CD8+T细胞来源的微泡含量上升；而肝脏干细胞分泌的微泡中多种miRNAs上调。外泌体给后续实验产生了许多障碍。海洋生物外泌体PKH67

磁珠免疫法分离外泌体：将针对目的抗原的抗体通过生物素-链霉亲和素连接到磁珠表面，然后将磁珠与样品共孵育，使外泌体特异性结合到磁珠上形成磁珠-外泌体复合物，再用蒸馏水或者PBS冲洗，结尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脱获得外泌体。该方法相对于ELISA的好处主要是，珠粒提供了更大的表面积来捕获外泌体，从而提高了分离效率。此外，使用磁珠时，样品起始体积没有上限，而基于微孔板的ELISA分析的较大样品体积为100μL，且ELISA洗脱杂质时容易造成孔间交叉污染。当将磁珠法与金标准外泌体分离方法进行比较时，磁珠法可分离出更纯净的外泌体，特异性高、速度更快，并且不需要昂贵的仪器。另外，与其他分离方法（如超速离心或超滤）相比，磁珠法不影响外泌体形态。但是采用磁珠法时，外泌体生物活性易受PH和盐浓度影响。杭州外泌体Dil外泌体观察到它们可以在体内刺激免疫应答。

姜黄素的临床应用也存在着问题，比如其水溶性差，在体内代谢快速以及易被快速清chu。利用鼠淋巴瘤细胞系(EL-4)的外泌体作为姜黄素的载体，可以提高姜黄素的溶解性、稳定性以及生物利用度，将姜黄素和载有姜黄素的外泌体腹膜内注射到脂多糖(LPS)诱发的败血性休克的小鼠模型中，结果显示经外泌体运载的姜黄素可促进小鼠肺部抑制免疫反应的CD11b+Gr-1+细胞的凋亡而表现出抗yan症的效果，而单纯姜黄素的注射不能起到促进CD11b+Gr-1+细胞的凋亡效果(与注射PBS的对照组类似)。研究者还进行了目前常用的脂质体负载姜黄素，与外泌体负载姜黄素对比。脂质体和外泌体均具备作为姜黄素的载体的能力，但外泌体由于其更易被Gr-1+细胞吞噬，从而可以起到更好的zhiliao效果。

外泌体研究背景：胞外囊泡是从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的具有双层膜结构的囊泡状小体，主要由微囊泡、凋亡小体、外泌体组成。而外泌体是其中一类小囊泡，直径为30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可携带核酸、蛋白质质和脂质等，存在于血液、唾液、尿液等多种体液中。越来越多的研究证实，外泌体可以通过细胞间转移核酸、蛋白质、脂质等特定物质，发挥特殊的功能。如在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、肿细胞细胞发生了发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。

外泌体由于包含的内容物具有明显的组织特异性，为其能成为瘤早期诊断的生物标志物提供了重要保障。但目前对于外泌体miRNA、LnkRNA等的检测方法还不成熟，限制了外泌体用于疾病诊断中的应用。基于外泌体的诊断产品获得FDA批准上市，很大程度的增加了研发企业的信心。外泌体的异质性又决定了外泌体药物递送系统不能提供一个普适的递药策略，必须根据所传递治理物质的类型、目标组织的特点等进行针对性的进行策略调整。良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性等使外泌体在药物递送方向大有潜力。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。研究所外泌体提取试剂盒应用

流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。海洋生物外泌体PKH67

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀，极大地降低了外泌体的提取成本，且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子，同时也表达胎盘特异性蛋白分子，证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见，动态光散射分析粒径，结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间，与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后，与细胞共孵育，荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性，进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体，并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定，为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。海洋生物外泌体PKH67

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