湖南外泌体芯片

目前，提取外泌体的方法主要有超速离心法、PEG沉淀法，但这些方法混有非常多的杂质，必须慎重分析得到的是否是外泌体。超速离心法存在操作繁杂、回收量不稳定，不能用于定量分析、必须使用昂贵的超速离心机、无法进行多样品分析等问题。因此外泌体研究相对困难，需要尽快开发操作简单、可提取高纯度外泌体的技术。因此，日本和光着眼于巨噬细胞的外泌体受体Tim4蛋白，制备Tim4细胞外域与磁珠结合的“Tim4磁珠”。Tim4通过磷酯酰丝氨酸（PS）法特异性结合Tim4蛋白和磁珠，再经过含有EDTA的洗脱缓冲液进行分离，提取高纯度的完整外泌体。外泌体可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。湖南外泌体芯片

姜黄素的临床应用也存在着问题，比如其水溶性差，在体内代谢快速以及易被快速清chu。利用鼠淋巴瘤细胞系(EL-4)的外泌体作为姜黄素的载体，可以提高姜黄素的溶解性、稳定性以及生物利用度，将姜黄素和载有姜黄素的外泌体腹膜内注射到脂多糖(LPS)诱发的败血性休克的小鼠模型中，结果显示经外泌体运载的姜黄素可促进小鼠肺部抑制免疫反应的CD11b+Gr-1+细胞的凋亡而表现出抗yan症的效果，而单纯姜黄素的注射不能起到促进CD11b+Gr-1+细胞的凋亡效果(与注射PBS的对照组类似)。研究者还进行了目前常用的脂质体负载姜黄素，与外泌体负载姜黄素对比。脂质体和外泌体均具备作为姜黄素的载体的能力，但外泌体由于其更易被Gr-1+细胞吞噬，从而可以起到更好的zhiliao效果。杭州腹水外泌体有望在外泌体和微囊泡生理功能的分析研究上起重大贡献。

建立记录各论文实验条件的数据库也可作为规避混乱的方法之一。一方面，随着EV研究倍受世界瞩目，各国启动了大型研究项目。美国启动NIH战略性大型项目（ExtracellularRNACommunication），国际厉害性学会——Gordon和KeystoneSymposia也从2016开始成立会议小组。受到欧洲药物研究开发公司“创新药物倡议组织（IMI）”的支持推进的CANCER-ID项目，也包含EV研究在内。2017年日本选定了EV研究为文部科学省研究开发战略的目标之一，期待会加速今后的研究发展。无论如何，今后EV研究的根本就是必须有强有力的研究方法和技术，而PS亲和法有望成为其中之一。

瘤在生长过程中会不断地将外泌体释放到周围环境中去，同时，外泌体能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更长时间，可以从患者的体液中分离外泌体用于早期临床诊断。随着技术的进步，已经有生物公司尝试涉足外泌体领域，外泌体中存在黑色素瘤标志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相关蛋白，且黑色素瘤患者胞外体中MIA和S100B浓度显着高于健康人群和非黑色素瘤患者，通过检测MIA和S100B表达水平对黑色素瘤的诊治具有积极地参照作用。从本质上说，液态活检是分子诊断在样本来源上的延伸，进一步丰富了检测手段，而随着外泌体的不断揭秘，相信其会在液态活检中发挥越来越重要的作用。外泌体天然的可以携带遗传到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。对分离的外泌体进行体外标记或示踪，有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。吉林CD63外泌体慢病毒

外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。湖南外泌体芯片

外泌体可以调控星状细胞（HSC）活化，并参与HSC细胞迁移的进程。活化的HSC来源的外泌体中，CCN2表达升高，Twist1和miR-214表达被抑制，这些外泌体还能诱导静止的HSC细胞表达CCN2。此外，Twist1可以诱导miR-214表达从而抑制CCN2的表达。CCL4处理的外泌体和外泌体SK1/S1P会诱导HSC迁移。MSC分泌的外泌体可以有效减缓肝纤维化过程，这可能成为肝纤维化治理的靶点。研究显示，CP-MSC来源的外泌体miR-125b可以抑制Hedgehog信号通路的活化，抑制纤维化；而HUC-MSC分泌的外泌体可以逆转细胞形态和TGF-β1诱导的EMT进程，减弱肝纤维化。湖南外泌体芯片

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