外泌体蛋白质提取

与正常细胞相比，中流细胞外泌体的分泌量增多，内容物也存在明显差异。由于囊泡结构的保护，中流细胞来源的外泌体内携带有大量中流细胞来源的活性生物分子，其特点包括:(1)提供具有稳定构象的蛋白质分子;(2)保持蛋白质的生物活性;(3)携带其中的生物分子经体液运输至远端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流细胞来源的外泌体能够与靶细胞之间进行更有效的信息交流。外泌体介导中流转移:体外研究和体内成像实验表明恶性中流细胞产生的外泌体可以在全身水平上被同一中流或远端中流中恶性程度较低的ai细胞摄入，其内所包含的与转移相关的mRNAs进入转移性较低的细胞后，能够增强其转移能力。有报导指出，外泌体内miRNA参与促进血管新生、抗症性和促进胶原蛋白沉淀等一系列过程。外泌体蛋白质提取

除运输药物进行疾病zhiliao之外，外泌体还能进行免疫zhiliao，外泌体免疫zhiliao和载药zhiliao。进行免疫调节时，外泌体通常运载TGF-β1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物质。在这些研究中，分泌外泌体的母代细胞往往选用具有很好抗原递呈(antigenpresentation)能力的树突细胞或者中流细胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤细胞作为母代细胞，通过热处理的方式使淋巴瘤细胞分泌的外泌体含有更多的热休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子，如主要组织相容性复合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等，与未热处理的鼠B淋巴瘤细胞分泌的外泌体相比，热处理后分泌的外泌体可以增强对T细胞的激huo能力，从而增强这种基于外泌体的疫苗的抗中流能力。尿液提取试剂盒方法外泌体功能在研究初期阶段发现是参与细胞成熟过程中去除不必要的蛋白质。

外泌体在神经系统中与神经回路的控制相关，同时各种神经退行性疾病的致病蛋白还可以通过外泌体释放到细胞外并传递到其他细胞，与病情发展密切相关。病细胞释放的外泌体含有许多与血管新生和免疫逃逸相关的分子，构建适合病细胞生长的微环境，促进病细胞的发展。另外，病细胞来源的外泌体上粘着分子的表达形式决定着症状向身体部位的转移途径。近，有报告指出脂肪细胞释放的外泌体对肝脏的遗传基因表达有控制作用。许多病毒利用外泌体的产生路径传播细胞，受病毒传播的细菌和寄生虫通过外泌体控制其他受细胞传播的细菌、寄生虫的活动。

为获得外泌体的大小、浓度、形态及蛋白质组成等信息，可以通过电镜、动态光散射、纳米颗粒跟踪分析仪、蛋白质免疫印迹、酶联免疫吸附法、流式细胞仪等对外泌体进行表征。通过电镜可获得外泌体的形态信息，不同类型的显微镜由于操作环境不同，得到的外泌体形态存在差异。例如，在扫描电镜、透射电镜和原子力显微镜中，外泌体呈现囊泡独有的茶托形，可能由于样品在固定或染色过程中极度脱水，导致外泌体塌陷所致。与之相反，在冷冻电镜中外泌体呈现圆形，由于不会脱水变性，所得的外泌体形态可能更加接近囊泡的真实状态。另外，由于透射电镜和原子力显微镜具有较高分辨率，也能够提供外泌体磷脂双分子层厚度、粒径分布等信息。外泌体具有检测包括病症在内的许多病理状况的潜力，可用于对心血管疾病和病症等多种疾病的诊断和监测。

外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志，而且可作为天然的药物传递载体。外泌体能够负载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等，且在体液中宽泛分布且具有定向归巢能力。外泌体独特的生物兼容性、高稳定性、瘤靶向性使其在未来瘤治理中有很大的利用价值。外泌体能够装载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等。作为小分子化合物载体，外泌体装载姜黄素、紫杉醇、阿霉素等主要是用于抗瘤研究；已经发现外泌体可递送多种蛋白质，例如酶，细胞骨架蛋白质和跨膜蛋白质；外泌体作为核酸分子的药物载体主要用于基因治理，外泌体天然的可以携带遗传（例如miRNA，siRNA）到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。外泌体观察到它们可以在体内刺激免疫应答。不同来源外泌体的区别

外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。外泌体蛋白质提取

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀，极大地降低了外泌体的提取成本，且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子，同时也表达胎盘特异性蛋白分子，证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见，动态光散射分析粒径，结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间，与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后，与细胞共孵育，荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性，进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体，并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定，为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。外泌体蛋白质提取

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