细胞外囊泡的鉴定方法

外泌体由于包含的内容物具有明显的组织特异性，为其能成为瘤早期诊断的生物标志物提供了重要保障。但目前对于外泌体miRNA、LnkRNA等的检测方法还不成熟，限制了外泌体用于疾病诊断中的应用。基于外泌体的诊断产品获得FDA批准上市，很大程度的增加了研发企业的信心。外泌体的异质性又决定了外泌体药物递送系统不能提供一个普适的递药策略，必须根据所传递治理物质的类型、目标组织的特点等进行针对性的进行策略调整。良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性等使外泌体在药物递送方向大有潜力。PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。细胞外囊泡的鉴定方法

肺病细胞来源外泌体（LCC-exosome）可以通过刺激种瘤血管的形成来促进种瘤的生长。据相关报道称，LCC-exosome中的miR-210可以通过调节基质细胞中酪氨酸受体激酶A3的含量，促进种瘤血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a则可以通过开启脯氨酰羟化酶及压制紧密结合蛋白ZO-1来促进肺病的生血管作用。此外，有研究发现，外泌体中的内容物可以触发上皮-间质转化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌体波形蛋白表达增加，促使人正常支气管上皮细胞出现EMT，从而使肺支气管正常上皮细胞出现增殖，迁移能力。科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。江西外泌体荧光标记从研究上来讲并不太严格区分外泌体或微泡。

外泌体的生物发生途径主要包括三个关键的检查点：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和细胞膜的融合，这三个检查点都包含在内体相关的囊泡运输过程中。RABGTPase定位到特定膜结构的表面，通过招募效应因子来调节相应膜结构的囊泡运输，例如，在内体溶酶体运输网络中，RAB5调节早期内体的形成及相互融合；内体膜上RAB5到RAB7的转换调节早期向晚期内体的转变；RAB7调节晚期内体/MVEs与溶酶体的融合来降解ILVs；RAB27调节MVEs与细胞膜的对接和融合来释放ILVs形成外泌体。内吞的膜蛋白，特别是受体酪氨酸激酶家族的表皮生长因子受体，定位到内体和MVEs，通过MVEs和溶酶体融合来进入溶酶体降解，此过程受多种RABGTPases和ESCRT复合体的调控。

Buller等利用miR-146b的质粒转染间充质干细胞，使其分泌的外泌体负载miR-146b，并将外泌体注射至移植到小鼠体内的GBM处。结果表明，这种利用外泌体运输miRNA进行zhiliao的方法可以有效抑制中流的生长。对于GBM类脑部中流，体内zhiliao不同于体外细胞实验，更需考虑脑部组织微环境对药物的影响，外泌体可运输miRNA并不破坏其在脑部中流组织处的原本功效。然而，至今还没有利用外泌体载药经静脉注射zhiliaoGBM的报道，这主要是由于跨越血脑屏障(BBB)仍然是外泌体进行脑部中流zhiliao需要解决的难题。尽管如此，Wood等报道的在进行阿兹茨海默病zhiliao时利用对脑部神经元特异性肽RVG靶向的外泌体穿过BBB的研究显示了经靶向修饰的外泌体具备穿过BBB的潜力，因此外泌体载药zhiliao具有广阔的前景。血液中的成纤维细胞所释放的外泌体，可以促进角质形成细胞的移动和增殖以及血管新生来促进伤口愈合。

外泌体作为疾病诊断的标志物具有其独特优势:(1)与正常细胞相比，病变细胞产生的外泌体在分泌量和内容物方面存在明显差异。病变的细胞和组织能够产生更多外泌体。(2)由于特殊的生成方式，外泌体的组成不同于来源细胞。其内包含的一些特异性蛋白质能够揭示外泌体的起源、结构和运输方式，有利于深入了解外泌体的产生机制。(3)病变细胞分泌的外泌体通过胞吐的过程进入血液、尿液等体液，囊泡状结构能够保护外泌体内部生物分子不受体液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干扰，有利于保持其结构完整和生物活性，通过对此类体液进行分析可以实现疾病的无创或微创检测。干细胞外泌体摄取流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法。山东外泌体测序

磁珠免疫法分离的外泌体，生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。细胞外囊泡的鉴定方法

外泌体起源于多泡体,以细胞管腔内囊泡的形式存在.细胞的胞吞形成带有外源性抗体的内体小泡,在高尔基体等细胞器的作用下形成早期核内体,早期核内体的囊膜内陷、突入形成多个小囊泡,并选择性的接受细胞内的蛋白质、核酸、脂类等成分,较终形成晚期核内体,晚期核内体与细胞膜融合,并将外泌体排出胞外。这是一个连续而又复杂的过程,从内体小泡到成熟外泌体,需要在各细胞器间传递并包装,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神经酰胺、胆固醇等。外泌体的排出跟其他胞内小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的调控,敲除细胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌体不能排出,且从高尔基体到晚期核内体的囊泡运输不受影响。细胞外囊泡的鉴定方法

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