湖南如何使用糖原染色试剂盒量大从优

染色试剂盒：GUS基因就是β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuronidase)，是从大肠杆菌K-12菌株分离出的一种酸性水解酶。该基因产物为β-葡萄糖苷酸酶，属水解酶类，相当稳定而不易降解，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被普遍应用于基因调控的研究中。根据GUS基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法较高）。其中较为常用的是组织化学法。糖类从组织化学技术角度来分，可分为多糖、中性粘液物质。湖南如何使用糖原染色试剂盒量大从优

糖原染色――检查项目的注意细节：其判断标准随细胞不同而异，一般分为5级，即0～4级。糖原染色――检查项目的一般步骤：(1)新鲜干燥血片或骨髓片于95%乙醇中固定10min，蒸馏水冲洗数次，待干。(2)浸入10g/L过碘酸水溶液中10min，蒸馏水冲洗数次，待完全干燥。(3)放入雪夫液30min，用自来水冲洗约5min，再用蒸馏水冲洗，然后用20g/L甲基绿复染20min，水洗，晾干。糖原染色――检查项目结果解读：(1)新鲜干燥血片或骨髓片于95%乙醇中固定10min，蒸馏水冲洗数次，待干。(2)浸入10g/L过碘酸水溶液中10min，蒸馏水冲洗数次，待完全干燥。(3)放入雪夫液30min，用自来水冲洗约5min，再用蒸馏水冲洗，然后用20g/L甲基绿复染20min，水洗，晾干。天津哪家提供糖原染色试剂盒单价如用无水酒精作糖原的固定剂，有它的弊病。

糖原染色法：染色原理细胞胞浆中存在糖原或多糖类物质（如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等），过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化为二醛基，其与Schiff试剂中的无色品红结合后呈现紫红色，沉积在细胞内多糖所在之处。染色步骤：1.组织石蜡包埋切片后脱蜡至水，蒸馏水洗2min（细胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗）；2.滴加过碘酸溶液，氧化5min；3.蒸馏水洗10min；4.滴加Schiff试剂，侵染10-20min；5.倾去Schiff试剂，流水冲洗10min；6.滴加苏木素染色液，染核1-2min；7.流水冲洗5min；8.酸性乙醇分化液分化

染色的一般原则：因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用凋亡诱导处理的细胞做单阳对照，进行荧光补偿的调节。标记抗体常用荧光素FITC，EGFP激发光：488nm发射光：525nm;使用面较广，价格便宜。PE激发光488nm发射光575nm，此荧光的激发效率较佳，故此荧光得到的信号较强；检测某些弱表达的抗原，推荐使用此荧光素。价格较FITC昂贵。APC激发光633nm，发射光660nm，在配有双激光的流式细胞仪上，此荧光染料可与7-AAD或PI共同使用来避开自带绿色荧光的样本。流式细胞仪相关试剂盒。过碘酸氧化时间不宜过久，氧化时的温度以18～22℃佳。

GUS染色步骤：1.将准备好的材料浸泡在GUS染色液中，于25-37℃保温1小时至过夜。2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和部位的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。糖原在肝脏及心肌疾患及某些的病变中分布和量都有一定改变。哪家生产糖原染色试剂盒厂家直销

0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液。湖南如何使用糖原染色试剂盒量大从优

糖原染色试剂盒。含乙二醇基的多糖经过碘酸氧化，产生醛基，与雪夫（Schiff）试剂中无色品红结合，形成紫红色沉淀物定位于含糖原的胞浆中。该反应称为碘酸-雪夫（PAS）反应。（1）雪夫液配制：碱性品红1g溶于200ml沸水中，冷却60℃时过滤，加1mmol/L盐酸20ml，再冷却至25℃左右，加偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）2g，混合后放棕色瓶中，置暗处24h，无色即可放冰箱中保存，呈微红色，则加活性炭1～2g，吸附过滤使成无色液体，放冰箱中保存。若溶液变红，即不能再用。（2）10g/L过碘酸水溶液：过碘酸（HIO4·2H2O）1g,加蒸馏水至10ml。溶解后盖紧放冰箱备用，一般可用3个月，变黄则失效。湖南如何使用糖原染色试剂盒量大从优