在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白质的模板,内容按照细胞核中的DNA所转录;tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者;rRNA是组成核糖体的组分,是蛋白质合成的工作场所。细胞中还有许多种类和功能不一的小型RNA,像是组成剪接体的snRNA,负责rRNA成型的snoRNA,以及参与RNAi作用的miRNA与siRNA等,可调节基因表达。而其他如I、II型内含子、RNaseP、HDV、核糖体RNA等等都有催化生化反应过程的活性,即具有酶的活性,这类RNA被称为核酶。在病菌方面,很多病菌只以RNA作为其中的遗传信息载体(有别于细胞生物普遍用双链DNA作载体)。在裂解液上游加入酶裂解步骤(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。贵阳RNA提取试剂厂家

Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,压制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。异硫氰酸胍氯化铯超速离心法:原理:使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效压制RN A 酶的活性,经过起始密度为 1.78g/m l 的氯化铯介质,进行密度梯度超速离心,RNA沉淀于管底,而DNA与蛋白质在上清液中。使用这种方法,不但能得到高质量的RN A ,而且能同时分离出细胞染色体DNA。RNA提取试剂供应商以及参与RNAi作用的miRNA与siRNA等,可调节基因表达。

RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水,基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题。在PBS中加入不同浓度RNase A,高压或不高压,后溶解P-32标记RNA 探针。较后数据显示,除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml,否则常规高压过的水,基本检测不出RNase A活性。当然,Thermo的科学家也很谨慎,说这个结论*适用于RNase A,不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材,因为太费劲,而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂,我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵,一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂,比如酶、siRNA等,也都会送这样的水。在耗材方面,直接使用大公司的离心管和吸头,根本不用担心核酸酶的问题。
RNA提取注意事项:使用时一定要根据自己的实验需要购买**提取试剂盒, 如果不是**试剂盒,或许能提出RNA,但不能确保其质量以及完整性,会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。当前提取效果好的是RNA提取试剂盒,但其售价较高,单次实验费用花费太大,对精度要求不高的实验没有必要购买,当然还有其它的进口试剂盒,但是均存在价格高、订货周期长的问题(如果碰上国内无货的时候,要从国外发货,会等很长一段时间)。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以,价格不高,基本上各地均有现货(国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种)等,其价格比进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。带口罩、帽子,屏住呼吸、不说话,带乳胶手套并要时常更换。

法尔和梅洛的发现。科学家在矮牵牛花实验中所观察到的奇怪现象,其实是因为生物体内某种特定基因“沉默”了。导致基因“沉默”的机制就是RNA干扰机制。此前,RNA分子只是被当作从DNA(脱氧核糖核酸)到蛋白质的“中间人”、将遗传信息从“蓝图”传到“工人”手中的“信使”。但法尔和梅洛的研究让人们认识到,RNA作用不可小视,它可以使特定基因开启、关闭、更活跃或更不活跃,从而影响生物的体型和发育等。诺贝尔奖评审会在评价法尔和梅洛的研究成果时说:“他们的发现能解释许多令人困惑、相互矛盾的实验观察结果,并揭示了控制遗传信息流动的自然机制。这开启了一个新的研究领域。”操作过程更是要求必须在超净台进行或者在RNA提取专区进行,离心机、移液器、试剂**。徐州石家庄RNA提取试剂
目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。贵阳RNA提取试剂厂家
总RNA 快速提取试剂盒背景资料;EpiQuik™总RNA分离快速试剂盒为从哺乳动物细胞和组织中分离总RNA提供了一种快速、简单和经济有效的方法。洗涤剂用于溶解细胞和灭活核糖核酸酶。特殊的高盐缓冲系统允许蛋白质/DNA被去除,RNA结合到自旋柱的玻璃纤维基质上,同时污染物通过柱。杂质被有效地冲洗掉,纯净的RNA被洗脱。该试剂盒纯化的RNA适用于多种常规应用,包括RT-PCR、cDNA合成、northern blotting、差异显示、引物延伸和mRNA选择。总RNA 快速提取试剂盒描述:本试剂盒包含了直接从培养细胞或组织中成功分离RNA所需的所有试剂。经过裂解、结合和洗涤后,使用特殊设计的柱可以很容易地回收高达10个氧化格的RNA。然后,总RNA准备用于各种下游应用。贵阳RNA提取试剂厂家
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植物花总RNA提取试剂盒:采用进口硅基质膜制作的总RNA吸附柱,配合特殊的提取缓冲液,可以从多糖多酚植物的根、茎、叶以及花组织中快速提取总RNA,40~60分钟内即可完成提取过程,提取的总RNA纯度高,没有DNA和蛋白质污染,适用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot杂交等实验。特殊的提取缓冲液保证特殊植物材料中的总RNA充分溶解。总RNA提取速度快,提取效率高。有效去除植物花组织中的多糖、多酚类等杂质,提取纯度高。细菌总RNA提取试剂盒:本试剂盒可以快速从细菌体内提取总RNA,提取的总RNA纯度高,没有DNA和蛋白质污染,适用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分...