厦门RNA提取试剂产品介绍

DNA和RNA的鉴别染色：利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室普遍采用。RNA是核糖核酸，DNA是脱氧核酸。区别：溶解性：都溶于水而不溶于乙醇，因此，常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶，故可用苯酚来沉淀RNA。在细胞中，RNA种类繁多。根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA、rRNA，以及mRNA。厦门RNA提取试剂产品介绍

酵母RNA的提取方法：浓盐法。酵母菌外层是厚达 1.2µm 的细胞壁，其化学成分 是葡聚糖（30-40%）和甘露聚糖（30%），此外，脂类8.5-13.5%，蛋白质 6-8%，还含有几丁质，酵母菌的葡聚糖，分子是为 240000 道尔顿，是一种分枝聚合物，葡聚糖与甘露糖之间由蛋白质维系起来。近 10% 的甘露聚糖的侧链通过磷酸二酯键与磷酸边接，所有这些连接方式都使得酵母提取物首要的也是关键的是如何破坏细胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多种方法，而用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞的通透性，就可以使核酸从细胞内释放出来。由于 RNA 钠盐易溶于水, 在含盐的菌体溶液中, RNA 有较高的溶解度, 这样, 通过控制温度使蛋白质变性沉淀,通过离心将 RNA 及蛋白质和脱核酵母菌体分离, 从而达到提取之目的。其中食盐起到自溶促进剂，以及防腐与脱臭的作用。RNA提取试剂推荐厂家好的试剂盒价格比较贵，在实验室可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。

细胞RNA提取的方法：异丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以见到侧壁沉淀，轻轻吸弃上清。向EP管中加入75%酒精洗涤沉淀，帮助分离剩余的有机试剂（剩余有机试剂过多会影响OD值和PCR反应），轻弹沉淀，使其浮在酒精，静置1-2min，让酒精充分接触沉淀，充分溶解有机试剂，然后4度离心5min。轻轻吸弃上清。将EP管再次放于离心机中瞬时离心，弃掉管壁残余液体。然后将EP管置于超净台中干燥5-10min.。注意RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。加入50ul DEPC处理水，震荡充分溶解沉淀。测量RNA浓度。将RNA保存于-80度。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质，能迅速破碎细胞，压制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，**白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。细胞裂解后，细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质，再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。RNA的定量计算1.RNA定量方法与DNA定量相似。RNA在260nm波长处有较大的吸收峰。因此，可以用260nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40μg/ml的单链RNA。如用1cm光径，用 ddH2O稀释DNA样品n倍并以ddH2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：RNA（mg/ml）=40×OD260读数×稀释倍数（n）/1000。2. RNA纯品的OD260/OD280的比值为2.0，故根据OD260/OD280的比值可以估计RNA的纯度。若比值较低，说明有残余蛋白质存在；比值太高，则提示RNA有降解。常用RNA提取方法有：1TRIzol法；2TRIzol+过柱法；3CTAB+过柱法；4试剂盒法。

RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水，基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题。在PBS中加入不同浓度RNase A，高压或不高压，后溶解P-32标记RNA 探针。较后数据显示，除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml，否则常规高压过的水，基本检测不出RNase A活性。当然，Thermo的科学家也很谨慎，说这个结论*适用于RNase A，不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材，因为太费劲，而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂，我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵，一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂，比如酶、siRNA等，也都会送这样的水。在耗材方面，直接使用大公司的离心管和吸头，根本不用担心核酸酶的问题。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上，同时使污染物通过柱被有效地洗去。北京RNA提取试剂厂家直销

为了使这种酶对降解的影响较小化，较好在采集时就稳定好样本中的 RNA。厦门RNA提取试剂产品介绍

如果把一个细胞比作一个城市，那么DNA就像是一个管理人员，它坐在细胞核内，监视着“细胞城”的一举一动，像哪里细胞膜破了需要修补，什么时候需要合成蛋白质，显而易见，光靠我们DNA管理人员一个人自然忙不过来啦，于是我们的DNA管理人员决定给自己找一些“打工仔”，它们就是RNA，但是近年来越来越多的研究发现，这些RNA似乎远远不止一个普通默默无闻的“公务员”那样简单，它们在基因表达中发挥着不亚于DNA的巨大的作用，如2006年诺贝尔奖生理/医学奖就颁发给了RNA干扰的两位发现者。RNA干扰现象的发现为遗传研究提供了一种强大的研究手段，这也说明这些对RNA的研究有着巨大的前景.而作为南大较好科研接班人的我们自然也不能甘于人后，于是我们决定从酵母RNA的提取开始做起。厦门RNA提取试剂产品介绍