杭州鼠尾胶原厂家

鼠尾Ⅰ型胶原：选择适当的骨修复材料是治好骨缺损的中心环节。目前，临床上常用的有人工骨移植、自体骨移植和同种异体骨移植。其中，人工骨材料多为磷酸三钙、半水硫酸钙等含有钙和磷的无机矿物材料[1-2]，由于不含自体骨组织中的有机大分子Ⅰ型胶原蛋白，其临床疗效远远低于自体骨组织。但是，自体骨移植和同种异体骨移植均来源于人类自身骨组织，数量有限，难以满足临床需要。因此，研发与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料，成为全世界骨组织工程学者孜孜以求的目标。由于天然骨组织是Ⅰ型胶原蛋白和羟基磷灰石钙生物矿化的产物，在分子结构上，羟基磷灰石钙晶体是以Ⅰ型胶原纤维为模板，呈片状镶嵌在胶原纤维分子间隙，沿着胶原纤维的长轴纵向矿化生长。本研究仿生天然骨组织的分子结构，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型胶原蛋白，重构形成Ⅰ型胶原纤维，然后将Ⅰ型胶原纤维放置在矿化液中模拟人体内骨生物矿化，通过透射电子显微镜(TEM)和电子衍射观察羟基磷灰石钙晶体在胶原纤维内部的骨生物矿化。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。鼠尾胶原，是一种细胞支持物，它是细胞外基质的主要成份。杭州鼠尾胶原厂家

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：三维胶原的制备 鼠尾胶原蛋白 型在浓度1mg/ml 以上， pH 左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度 1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中，在成胶过程中需要加入 0.06体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。 需要的溶液 （均需要无菌、 预冷） 10mg/L 酚红用于pH 指示） 0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一 般不用)，双蒸水 200ul鼠尾胶原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到胶原溶液中， 会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的 胶原凝结） 立即混匀。再加入 100ul 10PBS 10培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后 pH 左右，如果PBS 或培养液中没有加 酚红，初次使用时需要用 pH 试纸测试)。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。南昌鼠尾胶原直销价胶原蛋白（Collagen）是结缔组织和内脏部位外基质的主要成分。

胶原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解，水解条件温和，反应速率快，提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构，蛋白纯度高，理化性质稳定，且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法，即利用酶液直接提取；二步法，即先用酸或者碱进行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑，然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。Cabeza L.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白，探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响，给出了酶对胶原提取较佳工艺配比，酶与牛腱的质量比为0.1时效果较佳，而使用无花果蛋白酶时，0.01的配比较佳。

鼠尾胶原使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被以包被浓度为2μg/cm2为例，用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。加到相应的培养器皿中，确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干，也可以在室温放置1小时后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。三维胶原凝胶的制备：A、无细胞三维胶原凝胶的制备（以配制1mg/mL三维胶1mL为例）将200μL本品加到置于冰浴的离心管中，加入690μL双蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100μL10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要测定pH值）。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。加到相应的培养器皿中，确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定：通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化.超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定.结果 本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯.与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了较优的鼠尾胶原蛋白提取条件，胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.结论 为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。胶原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了产率和生物相容性，降低了成本，适用于生物医用材料。杭州鼠尾胶原供应商

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胶原的立体结构与一般的球状蛋白质完全不同，每一条亚基形成一股左手旋转的螺旋，其中每 3个氨基酸残基形成一圈螺旋。3 条左手螺旋再扭在一起形成一个右手大螺旋。这样的螺旋称为 3股螺旋。小的甘氨酸残基位于3股螺旋内部。3股螺旋式的棒状胶原分子的大小约是3000×15埃，这些棒状分子首尾相连，并侧向排列形成胶原微丝（其直径可从50埃至数千埃）。胶原分子在两端及沿轴向每隔 680埃的距离存在极性区，这些极性区能和重金属离子结合，使胶原纤维在电子显微镜下形成间距为680埃的明暗相间的特征性的横纹结构。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。杭州鼠尾胶原厂家