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细胞转染的注意事项：1.细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。因转染试剂对细胞有毒害作用，细胞太少，容易死。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2-4×106细胞/ml，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。细胞的融合度必须要达到90%才能做启动子的选择获得高转染活性所需选择的启动子依赖于选用的细胞系和要表达的蛋白。CMV启动子在大多数细胞类型中可以获得高表达活性。同其他启动子，如SV40和RSV(劳斯肉瘤细菌)相比，在BHK-21中其活性较高。这三种细菌启动子在T细胞来源的细胞系，如Jurkat中组成表达水平较低。转染后在培养基中加入PHA-L和PMA可以启动Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以启动KG1和K562(人骨髓瘤白细胞)中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提高，因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。是目前实验室较方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。青岛细胞高效转染试剂哪家好

细胞转染的注意事项：细胞状态这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于较佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。细胞复苏后的3代左右时细胞状态较好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化。大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。或者，几种来源于经筛选，转染效率较高细胞亚系的细胞系现在有售。合肥正规细胞高效转染试剂报价果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。

如何有效提高细胞转染实验效率：1.选择高效的转染方法不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定较佳转染条件。2.确保所构建载体的质量。转染载体的构建（细菌载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结果。细菌载体对特定宿主细胞传染效率较高，但不同细菌载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录细菌需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需考虑一些安全问题（如基因污染）。除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

细胞转染效率低下的几个大坑：1.试剂过期有时候转染效率低下，还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年，百思不得其解。较后发现，原来是Lipofectamine2000过期了。换了之后，立马成功。根据我的经验，尽量使用开封半年内的，因为过了半年后，就算没有过失效期，但是细胞毒性较大增加，而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱，影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验，其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候，较好不要换液，不要打扰细胞，让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话，会引起未转染的细胞疯狂生长。有血清时的转染 血清一度曾被认为会降低转染效率。

细胞转染实验简介：实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和细菌介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;细菌法是利用包装了外源基因的细菌传染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;细菌法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法蛋白表达和培养基的选择哺乳动物细胞系合成可溶的。芜湖天津细胞高效转染试剂

瞬时表达分析检测未重组质粒DNA上基因的表达。青岛细胞高效转染试剂哪家好

如何高效率实现细胞转染：DNA转染导入细胞胞浆内的DNA不能穿过细胞核的核膜（"核屏障"）。在细胞有丝分裂过程中核膜溶解，DNA进入细胞核才有可能。为此，细胞处于分裂期对DNA转染是至关重要的，并且处于分裂期的细胞比例必须尽可能大才能实现高效转染。DNA转染机制示意图如下所示：转染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)对于RNA转染是没有"核屏障"的，因为RNA不需要进入细胞核发挥其生物学效应，因此细胞分裂对它没有影响。转染试剂的选择理想的转染试剂选择可以使您的实验如虎添翼！真核细胞的先天免疫系统，使它们能够检测外来物质如脂多糖、细菌或细菌核酸和蛋白质，并克制潜在病原体的入侵。此外，细胞通过信使分子向临近细胞传递发现有害物质的信号。因此，这些临近细胞甚至无需接触病原体即可采取防御方式。这种细胞先天免疫系统也是转染成功的一个障碍。青岛细胞高效转染试剂哪家好