芜湖济南鼠尾胶原

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用：原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2诱导。24h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。制备鼠尾胶原（两个同学一组操作）。芜湖济南鼠尾胶原

鼠尾胶原实验应用：鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的：建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果：自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性，免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论：成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法，并且制作简便,成本低廉。石家庄鼠尾胶原哪家便宜胶原蛋白是结缔组织和内脏部位外基质的主要成分。

含细胞三维胶原凝胶的制备（以配制1mg/mL三维胶1mL为例）准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23μL10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要测定pH值）。加入760μL的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。本品在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。保存条件4℃保存，切勿冻存，有效期一年。

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用：胶原蛋白具有抗氧化作用，但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建，对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的：探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法：将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿（实验组）和普通培养皿（对照组）中，并且均用0，10，100μmol/LH2O2诱导。24h后，以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态，应用MTT比色法检测心肌细胞存活率，TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态，流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平，Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性。

三维胶原的制备：鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液(均需要无菌、预冷):10xPBS(可含10mg/L的酚红用于pH指示)或10x培养液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),双蒸水A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。芜湖正规鼠尾胶原直销厂家

利用鼠尾胶原可以构建类似物，该模型是进行皮肤部位型培养和制作复合皮的关键与基础。芜湖济南鼠尾胶原

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。1，在使用鼠胶原蛋白型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。1mg/ml浓度以上，pH左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格体积加到相应的培养器皿中。芜湖济南鼠尾胶原