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鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。1，在使用鼠胶原蛋白型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。1mg/ml浓度以上，pH左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格体积加到相应的培养器皿中。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。青岛正规鼠尾胶原厂家供应

鼠尾胶原的生物矿化和TEM观察：果冻样Ⅰ型胶原蛋白胶体初始浸泡在矿化液中时呈微白色；矿化2d后，胶体的颜色逐渐加深至乳白色；矿化6d后，随着羟基磷灰石晶体矿化长入胶原纤维内部，胶体颜色加深至纯白色，并在胶体表面沉积了一层薄薄的羟基磷灰石钙晶体，予镊子夹起，其表层羟基磷灰石钙晶体破碎散落。TEM表征显示：矿化2d后，Ⅰ型胶原纤维的明暗相隔周期性条纹结构逐渐模糊，羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维内部，胶原纤维部分矿化，沿着胶原纤维生长，忖度变深；矿化6d后，Ⅰ型胶原纤维的明暗相隔D-Band结构完全消失，胶原纤维内部可以看到黑色羟基磷灰石晶体，嵌入胶原纤维纵向生长。当鼠尾Ⅰ型胶原纤维完全矿化时，由于整条胶原纤维都被羟基磷灰石钙晶体占据，胶原纤维呈现黑色，选区衍射斑图符合羟基磷灰石表征。无锡正规鼠尾胶原价格碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。

鼠尾胶原蛋白的提取方法：1.将黏稠的胶体溶液进行高速冷冻离心处理，收集上清液；在冰水浴中，用的3〜6mol/L的NaCl溶液缓慢加入上清液中，不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出，4°C沉淀10小时，去除上清液，絮状溶液高速冷冻离心处理，收集沉淀2.用0.03〜0.06mol/L的柠檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，调节pH=6.5，用的3〜6mol/L的NaCl溶液缓慢加入上清液中，不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出，4°C沉淀10小时，去除上清液，去除上清液，絮状溶液高速冷冻离心处理，收集沉淀。

鼠尾胶原包被培养板：胎干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,进而形成血管,因而成为血管组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:探讨建立定向诱导人胚胎干细胞向血管内皮细胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养人胚胎干细胞H1,将H1细胞团块转移到鼠尾胶原包被的培养板,贴壁24-48h后,培养基换为含不同辅助因子和内皮细胞生长添加剂的EGM-2内皮细胞培养基。结果与结论:①在EGM-2内皮细胞培养基诱导下,细胞逐步表达内皮细胞特异性标记基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化细胞表达内皮细胞特异性标记VE-cadherin、CD31。③分化细胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。说明将人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上,通过EGM-2内皮培养体系诱导,可直接分化为功能性血管内皮细胞。为研究胞外基质对诱导胚胎干细胞血管内皮细胞分化的作用以及相关信号分子机制打下了基础。鼠尾胶原醋酸溶解：建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。

要准备的器具：组织剪2把，有齿镊1把，无齿镊1把，200ml烧杯1个，培养皿1个，带盖广口瓶1个，离心管、小瓶数个，滴管若干。以上物品须经严格高压消毒灭菌。需配制的液体0.1％醋酸溶液。经44.48N10min高压蒸汽灭菌(或是过滤除菌)后备用。此外还有用消毒双蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴，洗净，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴，用止血钳夹住尾巴较高，折断尾骨后拉出尾腱，将尾腱剪碎后置消毒的三角烧瓶中，称尾腱的重量，按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液，摇晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置48小时，离心。吸取其上清，分装至小瓶，4℃保存。上述制备过程均在无菌条件下完成。用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。苏州正规鼠尾胶原厂家推荐

建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。青岛正规鼠尾胶原厂家供应

鼠尾胶原醋酸溶解：1．将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3．稀释一定数量的胶原溶液。4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。青岛正规鼠尾胶原厂家供应

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