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抑肽酶(Aprotinin),一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛应用于生物技术领域。本研究探讨了利用大肠杆菌(E. coli)表达系统生产重组抑肽酶的方法,及其在科研和工业生产中的优势。引言抑肽酶,又称胰蛋白酶抑制剂,是一种小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶的活性。在生物制药、细胞培养和分子生物学研究中,抑肽酶的使用对于防止非特异性蛋白水解至关重要。传统的抑肽酶主要来源于动物,如牛肺,但存在外源病毒污染的风险。因此,利用大肠杆菌表达系统进行重组抑肽酶的生产,可以提供一种无动物源、高纯度、质量稳定的替代品。材料与方法基因克隆与表达载体构建:人源Ⅲ型胶原蛋白基因被克隆并构建到适合大肠杆菌表达的质粒载体中。大肠杆菌表达菌株的构建:通过转化,将构建好的质粒导入大肠杆菌宿主菌中,构建表达菌株。发酵培养:利用发酵罐进行大肠杆菌的扩大培养,以提升重组抑肽酶的产量。蛋白纯化:通过多次柱纯化获得高纯度的重组抑肽酶。泛素蛋白在细胞内发挥着调节蛋白质降解的作用,通过泛素-蛋白酶体途径标记蛋白质,被蛋白酶体识别并降解。Kassinin

Kassinin,标准物质

RecombinantBiotinylatedHumanHLA-A*02:01&B2M&MAGE-A4orMAGE-A8(KVLEHVVRV)MonomerProtein,His-AviTag性能参数分子别名(Synonyms)MAGE-A4orMAGE-A8;MAGE-A4;MAGE-A8;表达区间及表达系统(Source)BiotinylatedHumanHLA-A*02:01&B2M&MAGE-A4orMAGE-A8(KVLEHVVRV)MonomerProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-Terminus.ItcontainsGly25-Thr305(HLA-A*02:01),Ile21-Met119(B2M)andKVLEHVVRVpeptide.[Accession|A0A140T913(HLA-A*02:01)&P61769(B2M)&KVLEHVVRV]分子量大小(MolecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof50.50kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto52-62kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.纯度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制剂(Formulation)Suppliedas0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).储存条件Theproductshouldbestoredat-85~-65℃for1yearfromdateofreceipt.Recombinant Human IL-5全长跨膜蛋白A2AR,也就是腺苷受体A2aR(ADORA2A),是一种七次跨膜蛋白,属于G蛋白偶联受体。

Kassinin,标准物质

SARS-CoV-2,whichcausestheglobalpandemiccoronavirusdisease2019(Covid-19),belongstoafamilyofvirusesknownascoronavirusesthatalsoincludeMERS‑CoVandSARS-CoV-1.Coronavirusesarecommonlycomprisedoffourstructuralproteins:Spikeprotein(S),Envelopeprotein(E),Membraneprotein(M)andNucleocapsidprotein(N).TheSARS-CoV-2Sproteinisaglycoproteinthatmediatesmembranefusionandviralentry.TheSproteinishomotrimeric,witheach~180-kDamonomerconsistingoftwosubunits,S1andS2.TheRBDofSARS-CoV-2bindsametallopeptidase,angiotensin-convertingenzyme2(ACE-2).BeforebindingtotheACE-2receptor,structuralanalysisoftheS1trimershowsthatonlyoneofthethreeRBDdomainsisinthe"up"conformation.Thisisanunstableandtransientstatethatpassesbetweentrimericsubunitsbutisneverthelessanexposedstatetobetargetedforneutralizingantibodytherapy.PolyclonalantibodiestotheRBDoftheSARS-CoV-2proteinhavebeenshowntoinhibitinteractionwiththeACE-2receptor,confirmingRBDasanattractivetargetforvaccinationsorantiviraltherapy.

Trop-2,alsoknownasepithelialglycoprotein-1antigen(EGP-1),isaproteinthatinhumansisencodedbytheTACSTD2gene.Mutationsofthisgeneresultingelatinousdrop-likecornealdystrophy,anautosomalrecessivedisordercharacterizedbyseverecornealamyloidosisleadingtoblindness.产品性质别名EGP1;EGP-1;TROP2;GA733-1;gp50;T16;TACSTD2;TROP-2;M1S1;TACD2UniprotNo.P09758表达区间及表达系统RecombinantBiotinylatedHumanTROP-2/TACSTD2ProteinisexpressedfromHEK293cellswithHistagandAvitagattheC-terminal.ItcontainsHis27-Thr274.分子量TheproteinhasapredictedMWof30.5kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto46-55kDabasedonTris-BisPAGEresult.纯度>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC活性ELISAData:ImmobilizedAnti-TROP-2Antibody,hFcTagat0.5μg/mL(100μL/well)ontheplate.DoseresponsecurveforBiotinylatedHumanTROP-2,HisTagwiththeEC50of24.1ng/mLdeterminedbyELISA.0EUper1μgoftheproteinbytheLALmethod.制剂Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally5%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.随着医药科技的发展,透明质酸在医药这方面的应用将越来越多,包括作为药物载体和组织工程的基质。

Kassinin,标准物质

应用蛋白质糖基化分析Endo H常用于分析蛋白质的糖基化模式。通过Endo H处理,可以移除蛋白质上的高甘露糖型糖链,从而简化糖链结构,便于进一步的分析。生物制药在生物制药领域,Endo H用于改善重组蛋白药物的糖基化质量。通过调整培养条件和使用Endo H,可以优化蛋白质的糖链结构,提高药物的疗效和稳定性。疾病研究Endo H也在疾病相关蛋白质的糖基化研究中发挥作用。例如,肿瘤细胞表面的糖链结构与正常细胞不同,Endo H可用于研究这些变化及其在疾病进展中的作用。前景展望随着对蛋白质糖基化重要性认识的增加,Endo H的应用范围预计将进一步扩大。未来研究可能会集中在开发更高效、专一性的Endo H变体,以及探索其在个性化医疗和精细中的应用。结论Endo H作为一种重要的工具酶,在糖生物学研究和蛋白质工程中扮演着关键角色。深入理解其结构和功能,将有助于推动相关领域的科学进展和临床应用。透明质酸的生物相容性使其在生物材料领域具有潜在应用,如作为药物递送载体。N-Formyl-Met-Ala-Ser

在生物制药工业中,肠激酶用于生产重组蛋白质药物,通过专一性切割去除不需要的序列,提高药物纯度和活性。Kassinin

泛素化是通过三个酶促步骤实现的。在ATP依赖的过程中,泛素酶(E1)催化与泛素形成活性硫酯键,然后转移到泛素载体蛋白的活性位点半胱氨酸(E2)。泛素级联对特定底物蛋白的选择性依赖于E2结合酶(细胞中包含的相对较少)和泛素-蛋白连接酶(E3)之间的相互作用,迄今为止已经鉴定出600多种这种酶。E3s是一个大的,多样化的蛋白质组,其特征是几个确定的基序之一。这些包括HECT(与e6相关蛋白c端同源),RING(真正有趣的新基因)或U-box(没有Zn2+结合配体的完整补充的修饰的RING基序)结构域。而HECTE3s在泛素化过程中具有直接的催化作用,RING和U-boxE3s促进蛋白质泛素化。后两种E3类型充当适配器类分子。它们使E2和底物足够接近,从而促进底物的泛素化。虽然许多RING-typee3,如MDM2和c-Cbl,可以单独发挥作用,但其他一些是作为更大的多蛋白复合体的组成部分,如后期促进复合体。综上所述,这些多面的特性和相互作用使E3s能够利用泛素-蛋白酶体系统,在真核生物的所有细胞中提供一种强大而具体的蛋白质机制。该筛选了11种常用E2结合酶,可以筛选具有E3连接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.Kassinin

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重组人ITCH蛋白是一种重要的E3泛素连接酶,属于HECT(Homologous to E6AP C-Terminus)家族,在蛋白质降解、信号转导和免疫调节等多种细胞过程中发挥关键作用。ITCH蛋白通过催化底物蛋白的泛素化,调控其降解或功能改变,从而参与细胞周期、炎症反应和应激响应等生物学过程。该重组蛋白通常采用真核表达系统(如昆虫细胞或哺乳动物细胞)制备,以确保其正确的折叠和酶活性。ITCH蛋白具有典型的HECT结构域,能够特异性识别并结合底物蛋白,通过泛素-蛋白酶体途径介导其降解。其重组表达形式为研究人员提供了高纯度、高活性的蛋白工具,便于进行体外泛素化实验、蛋白相互作用研究及药物筛选等...

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