pA-Tn5转座酶是通过将ProteinA与Tn5转座酶进行融合来构建的。ProteinA是一种来源于金黄色葡萄球菌的蛋白质,它具有高亲和力结合大多数哺乳动物IgG抗体的Fc片段的能力。Tn5转座酶是一种能够识别特定DNA序列并在基因组上进行“剪切-粘贴”或“复制-粘贴”的酶。融合ProteinA的目的是为了在实验中实现对特定蛋白质的靶向。下面是pA-Tn5转座酶融合的一般步骤:1.**基因克隆**:首先,将Tn5转座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一个表达载体中。这通常涉及到分子克隆技术,如PCR扩增、限制性内切酶消化和连接酶连接。2.**融合蛋白设计**:设计一个融合蛋白,其中ProteinA的基因序列和Tn5转座酶的基因序列通过一个短的连接肽(LinkerPeptide)相连。这个连接肽通常包含几个氨基酸残基,以确保两个蛋白部分在融合后仍能保持各自的构象和功能。3.**表达载体构建**:将融合基因插入到适合的表达载体中,这个载体应该包含适当的启动子、标记基因(如抗性基因)和终止子,以确保融合蛋白在宿主细胞中得到高效表达。4.**宿主细胞表达**:将构建好的表达载体转化到宿主细胞(如大肠杆菌)中,通过诱导表达融合蛋白。泛素是一种小分子蛋白,存在于真核生物中,它在细胞内起到调节蛋白质降解、信号转导、细胞周期控制。Recombinant Cynomolgus LAMP5 Protein,His Tag

5'DNA腺苷酰化试剂盒是一种用于将单链DNA(ssDNA)5'端腺苷酰化修饰的实验工具,其主要应用于miRNA等3'端为羟基的RNA或单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时,在3'端添加的接头的制备。以下是5'DNA腺苷酰化试剂盒的一些关键特点和使用方法:1.**高效转化**:该试剂盒能将95%以上的5'端磷酸化的DNA(pDNA)转化成腺苷酰化DNA(AppDNA),从而提高产量并避免胶回收提纯步骤。2.**操作简便**:单步反应即可完成腺苷酰化,无需复杂的操作或额外的纯化步骤。3.**高温反应**:在65℃的高温下进行反应,这有助于避免DNA或RNA的二级结构对腺苷酰化反应的干扰。4.**适用性广**:适用于pmol级别至µmol级别的底物量,可以方便地根据实验需要放大反应体系。5.**组成成分**:试剂盒通常包含腺苷酰化酶(Adenylase)、ATP和所需的缓冲液,以及用于启动反应的5'-磷酸化的单链DNA。6.**保存条件**:一般建议在-20℃保存,有效期至少一年,长期储存建议在-70℃。7.**注意事项**:底物单链DNA或RNA的5'端磷酸化是必须的,而3'端可以进行氨基化等封闭,也可以不封闭。反应完成后推荐在85℃孵育5分钟以失活Adenylase,防止去腺苷酰化现象。Recombinant Mouse CD43 Protein,His Tag跨膜蛋白的表达与制备需要采用合适的表达载体、宿主细胞、培养条件和纯化工艺等方法,优化表达和纯化过程。

在5'DNA腺苷酰化试剂盒中,"5'"表示DNA分子的5'端,即DNA链的起始端。DNA和RNA分子由核苷酸单元组成,每个核苷酸由一个糖分子、一个磷酸基团和一个含氮碱基组成。在DNA中,糖分子是脱氧核糖。这些核苷酸通过磷酸二酯键连接在一起形成多核苷酸链。DNA链有两个端点,分别是5'端和3'端,这两个端点是根据糖分子上碳原子的编号来命名的:-**5'端**(5'-phosphategroup):这个端点的磷酸基团连接在脱氧核糖的第五个碳原子上。-**3'端**(3'-hydroxylgroup):这个端点的脱氧核糖上第三碳原子上有一个自由的羟基(-OH)。5'DNA腺苷酰化试剂盒的目的是将腺苷酸(AMP)加到DNA分子的5'端,形成5'-磷酸腺苷键。这种修饰对于某些分子生物学应用非常重要,例如在RNA干扰(RNAi)、高通量测序、连接反应或PCR检测中制备特定的接头或适配体。在5'DNA腺苷酰化试剂盒中,通常包含一种酶(如腺苷酸化酶或某些RNA连接酶),它可以催化将ATP中的AMP部分转移到DNA的5'端磷酸基团上,从而完成腺苷酰化过程。
pA-Tn5转座酶的高活性是其重要特性之一,这种高活性主要来源于以下几个方面:1.**转座酶突变体**:pA-Tn5转座酶是由Tn5转座酶的高活性突变体构成的。这种突变体相比野生型Tn5转座酶,在体外的转座效率显著提高,通常提升1000倍以上。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5转座酶将ProteinA与高活性Tn5转座酶融合,这种融合不仅保留了Tn5转座酶的高效DNA切割能力,还通过ProteinA的抗体结合特性,提高了对特定DNA序列的靶向能力。3.**转座随机性**:pA-Tn5转座酶能够在整个基因组上实现随机的DNA切割,这为高通量测序提供了广的覆盖度。4.**稳定性**:高活性的pA-Tn5转座酶在各种实验条件下都能保持稳定,包括在不同的温度和pH值条件下。5.**插入位点易测序**:pA-Tn5转座酶产生的DNA片段具有明确的插入位点,这些位点容易被高通量测序技术识别和分析。6.**高效片段化**:在CUT&Tag等实验中,pA-Tn5转座酶能够高效地实现目标蛋白结合DNA的片段化,为后续的测序和分析打下基础。7.**低细胞投入量**:由于其高活性,pA-Tn5转座酶允许从极少量的细胞中进行实验,如单细胞水平的研究。

dITP(脱氧肌苷三磷酸)在PCR(聚合酶链反应)扩增中的应用是特定和有限的。以下是dITP在PCR扩增中的一些关键点:1.**PCR扩增中的使用**:dITP可以在某些类型的PCR中替代部分dGTP,特别是在使用某些特殊的DNA聚合酶时,例如那些不具有校正(proofreading)功能的酶。2.**替代比例**:在PCR中,dITP通常不能完全替代dGTP,因为这样做可能会抑制PCR扩增反应。通常推荐在PCR反应中使用10%的dITP来代替dGTP。3.**特殊DNA聚合酶**:某些高保真DNA聚合酶,如碧云天生产的Q6U™高保真DNA聚合酶,可以与dITP一起使用,以提高PCR扩增的特异性和效率。4.**dNTP/dITP混合物**:在一些PCR应用中,会使用dNTP/dITP混合物,其中包含2.5mM每种dNTP加上0.25mM的dITP,以优化扩增条件。5.**PCR反应条件**:dITP的使用可能需要优化PCR反应条件,包括退火温度、Mg2+浓度和循环次数。6.**稳定性和储存**:dITP溶液应储存在-20°C或更低的温度下,以保持其稳定性。使用时应避免多次冻融,以防止降解。7.**安全性和专业性**:dITP和其他PCR组分应由专业人员用于科研目的,不应在临床诊断中使用。CB1受体分布于大脑和外周神经系统中,与多种生理功能有关,包括疼痛感知、食欲调节、情绪调节。Recombinant Rat PDGF R beta/CD140b Protein,His Tag
在一项研究中,比较了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑马鱼基因组编辑中的效率。Recombinant Cynomolgus LAMP5 Protein,His Tag
Benzonase核酸酶是一种来自粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的非特异性核酸内切酶,它能够高效降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线性和环状核酸,将其消化成2至5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。这种酶在生物技术领域有着广泛的应用,包括:1.**降低粘度**:在蛋白样品制备过程中,Benzonase核酸酶可以降低由于核酸引起的高粘度,从而便于样品处理和提高蛋白产量。2.**去除核酸污染**:在蛋白提取、疫苗生产、生物制药等领域,Benzonase核酸酶用于去除样品中的核酸污染,确保产品质量。3.**提高蛋白质分离效果**:在双向SDS-PAGE蛋白样品制备中,Benzonase核酸酶可以去除带负电荷的核酸,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率。4.**促进蛋白质复性**:在高质量包涵体制备中,Benzonase核酸酶有助于降解核酸,从而促进不可溶性蛋白的复性。5.**稳定性和兼容性**:Benzonase核酸酶在多种条件下稳定,包括高浓度的尿素,且与蛋白酶抑制剂兼容,但需注意EDTA对其活性的抑制作用。此外,Benzonase核酸酶的活性单位定义为在30分钟内使△A260值降低1.0的酶量,相当于完全消化37μgDNA。Recombinant Cynomolgus LAMP5 Protein,His Tag
PhusionDNAPolymerase是一种高性能的热稳定DNA聚合酶,以其保真度、快速扩增能力和强大的反应稳定性而闻名,被广应用于分子生物学的各个领域。PhusionDNAPolymerase的重要优点在于其高保真性。其错误率比TaqDNA聚合酶低50倍以上,比PfuDNA聚合酶低6倍。这种高保真性使其成为克隆、测序模板制备、突变分析以及长片段或高GC含量模板扩增等应用的理想选择。此外,Phusion酶的独特结构融合了类似Pyrococcus来源的酶和增强持续合成能力的结构域,使其在扩增速度和稳定性方面表现出色。PhusionDNAPolymerase的另一个特点是其快速扩增能力。其延伸速...