Recombinant Human FSHB Protein

Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在PCR产物的克隆中主要应用在以下几个方面：1.**单链DNA的生成**：-Lambda核酸外切酶可以用于从双链DNA中生成单链DNA。由于该酶沿5'→3'方向逐步切去5'单核苷酸，底物是5'磷酸化的双链DNA，因此可以用来消化PCR产物中的一条链，从而生成单链DNA，这对于某些克隆技术来说是必要的步骤。2.**PCR产物的克隆**：-在克隆过程中，有时需要将PCR产物的5'端磷酸化，以便与载体连接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA，从而在一定程度上帮助准备适合克隆的PCR产物。3.**减少自身环化和非特异性连接**：-在连接反应中，为了减少质粒载体的自身环化，可以使用碱性磷酸酶处理质粒DNA以去除5'磷酸基团。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA，因此在某些情况下，它可以辅助减少PCR产物的自身环化，尤其是在PCR产物和质粒载体的连接反应中。4.**提高克隆效率**：-通过消化PCR产物中的一条链，Lambda核酸外切酶可以帮助减少PCR产物的非特异性连接，从而提高克隆的效率和准确性。综上所述，Lambda核酸外切酶在PCR产物的克隆中主要通过生成单链DNA、准备适合克隆的PCR产物、减少自身环化和非特异性连接以及提高克隆效率等方面发挥作用。牛痘DNA拓扑异构酶I是一种来源于牛痘病毒的酶，有多种作用于DNA分子的能力。Recombinant Human FSHB Protein,hFc Tag

BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一种来源于嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillussubtilis）的DNA聚合酶。这种酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性，但缺失了5'-3'核酸外切酶结构域，因此它具有链置换活性，可以用于重组酶聚合酶扩增（RPA）等恒温扩增技术。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些关键特性和应用：1.**活性定义**：在37°C条件下，30分钟内将10nmol的dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。2.**热失活条件**：75°C，20分钟。3.**酶保存液成分**：25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**储存条件**：-25~-15°C保存，有效期2年。5.**注意事项**：-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性，BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配对的突出末端，因而不适用于生成平齐末端。-25°C时BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性，是同温度下Klenow片段(3'-5'exo-)的两倍。6.**应用**：-随机引物法标记。-cDNA第二条链的合成。-单个dA的加尾。-链置换的DNA合成。Recombinant Human FSHB Protein,hFc Tag泛素连接酶E3识别特定的靶蛋白，并促进E2上的泛素转移到靶蛋白的赖氨酸残基上，形成泛素化标记。

T5核酸外切酶在基因克隆中的优势主要体现在以下几个方面：1.**高效性**：T5核酸外切酶依赖性组装（TEDA）方法在常规克隆中的效率与使用专有DNA聚合酶的商业In-Fusion方法相似，但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA连接酶的Gibson方法。2.**低成本**：TEDA方法每个反应使用0.04U的T5核酸外切酶，价格为0.25美分，具有很高的成本效益。3.**简单性**：TEDA方法的反应混合物非常简单，易于操作，这使得它在预算有限的实验室中尤其有用。4.**灵活性**：TEDA方法能够组装多个DNA片段，并在多个位点同时进行定点诱变，提供了一种灵活的克隆和突变方法。5.**阳性克隆率**：使用T5核酸外切酶的无缝克隆技术可以确保100%的阳性克隆率，这提高了实验的成功率。6.**协同作用**：在无缝克隆中，T5核酸外切酶与Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA连接酶协同作用，通过切割、填补和连接三个步骤，高效地完成DNA片段的连接。7.**减少污染**：T5核酸外切酶可以降解碱裂解提取质粒中的变性DNA，减少超螺旋DNA的污染，提高DNA克隆和转染效率。这些优势使得T5核酸外切酶成为基因克隆中一个非常有价值的工具，尤其是在需要高效、低成本和操作简便的实验环境中。

T5核酸外切酶（T5Exonuclease）具有以下特点和技术应用：1.**降解方向**：T5核酸外切酶按照5'→3'方向降解双链或单链DNA。2.**起始消化位置**：T5核酸外切酶既能从单链或双链DNA的5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。3.**对超螺旋双链DNA的作用**：T5核酸外切酶无法降解超螺旋双链DNA。4.**单链DNA核酸内切酶活性**：T5核酸外切酶还具有单链DNA核酸内切酶活性。5.**应用领域**：-用于Gibson组装，这是一种在恒温条件下有效连接带有多个重叠序列片段的技术。-从完全连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物。-降解碱裂解质粒提取方法中产生的变性DNA，增加超螺旋DNA比例，提高DNA克隆和转染效率。-降解质粒样品中污染的线性化和切刻DNA。6.**操作条件**：推荐在37℃温育30分钟，之后加入EDTA至终浓度为20mM终止反应。7.**储存条件**：-25～-15℃保存，有效期3年。8.**注意事项**：避免起泡或剧烈搅拌、涡旋等操作，以防止本品失活。这些特点和技术应用使得T5核酸外切酶在分子生物学实验中，尤其是在DNA克隆和基因片段组装中，具有重要的应用价值。许多Probe qPCR Mix (2×)产品采用热启动DNA聚合酶，能减少非特异性扩增，提高反应的灵敏度和特异性 。

牛痘DNA拓扑异构酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）与细菌DNA拓扑异构酶的主要区别如下：1.**来源不同**：-牛痘DNA拓扑异构酶I来源于牛痘病毒，是一种真核生物病毒中的酶。-细菌DNA拓扑异构酶则来源于原核生物，如大肠杆菌的ω蛋白等。2.**功能特性**：-牛痘DNA拓扑异构酶I能够解旋DNA的超螺旋结构，并且识别并切割双链DNA末端[5’C(T)CCTT]，与DNA形成共价连接形成稳定复合物，遇到DNA的5’-OH基团后，重新连接形成完整DNA链。-细菌DNA拓扑异构酶，如大肠杆菌的ω蛋白，主要功能是催化DNA链断开和结合的偶联反应，以改变DNA的拓扑结构。3.**活性条件**：-牛痘DNA拓扑异构酶I即使在Mg2+不存在的条件下也显示活性。-细菌DNA拓扑异构酶可能需要Mg2+等金属离子作为辅因子来发挥活性。4.**作用的DNA链**：-牛痘DNA拓扑异构酶I能使正负两方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由来的DNA拓扑异构酶I只作用负链的超螺旋分子。5.**共价键形成**：-牛痘DNA拓扑异构酶I与DNA形成共价连接，此酯键中所贮存的能量可能在切断端的再结合上起着作用。-细菌DNA拓扑异构酶在原核生物中是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键。

FnCas12a的双链或单链DNA靶标都能激发其反式剪切活性，即在形成三元复合物后，针对非特异序列ssDNA的剪切。Somatostatin 28 (1-14)

UBE2L3与其他E2酶的区别在于它具有特定的结构特征，它包含一个高度保守的UBC结构域，这是E2酶家族的标志。Recombinant Human FSHB Protein,hFc Tag

T7EndonucleaseI（T7EI）是一种特殊的DNA内切酶，具有以下特点：1.**识别错配DNA**：T7EI能够识别并切割不完全配对的DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。2.**切割位点**：T7EI切割错配位点5'端的、第二或第三个磷酸二酯键。3.**灵敏度**：T7EI对错配DNA的识别非常灵敏，能够检测并切割单碱基和多碱基的错配。4.**应用**：T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因编辑技术导致的基因突变的鉴定。它通过识别错配DNA来帮助鉴定基因编辑是否成功以及是否有非目标效应。5.**直接电泳检测**：T7EI的产物可以直接通过电泳进行检测，这使得它在实验操作中更为方便。6.**来源**：T7EI来源于大肠杆菌菌株，是一种麦芽糖结合蛋白（MBP）和T7核酸内切酶I（T7EI）的融合蛋白。7.**成本效益**：尽管T7EI在商业上使用时成本较高，但它在大规模样本测试中，尤其是在基因突变鉴定方面，提供了一种有效的筛选方法。8.**特殊注意事项**：T7EI能够识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA，但不能识别1bp的插入、缺失或突变。这些特点使得T7EndonucleaseI成为基因突变鉴定中一个非常有用的工具，尤其是在CRISPR/Cas9等基因编辑技术的应用中。Recombinant Human FSHB Protein,hFc Tag