Lactoferrin (17-41)

不同的DNA聚合酶在PCR中的应用差异主要体现在以下几个方面：1.**TaqDNAPolymerase**：是常用的DNA聚合酶之一，来源于Thermusaquaticus，具有较高的热稳定性及扩增效率。但它缺乏3'-5'核酸外切酶活性，即没有校正功能，因此其保真性相对较低。Taq酶适合扩增较短的DNA片段（通常不超过3kb），且在PCR产物的3'端带A碱基，可直接用于TA克隆。2.**PfuDNAPolymerase**：来源于Pyrococcusfuriosus，是一种高保真聚合酶，具有3'-5'外切酶活性，可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配，有效防止误差累积。Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。3.**VentDNAPolymerase**：来源于Thermuslitoralis，具有中等保真度，比Taq聚合酶高两倍。它适用于GC含量高或复杂序列的PCR扩增，具有较高的热稳定性，半衰期可达6.7小时。4.**KODDNAPolymerase**：来源于Thermococcuskodakaraensis，具有高保真性和高热稳定性，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通PfuDNAPolymerase的5倍，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR产物。FnCas12a在切割DNA时产生黏性末端，有助于提高同源定向修复（HDR）的效率。Lactoferrin (17-41)

产品特点50× ROX Reference Dye的主要成分是高纯度的5-ROX甘氨酸，其浓度为25 µM，以50倍浓缩的形式提供。这种染料的荧光强度在PCR过程中保持稳定，不会因扩增反应而发生变化，因此可以作为理想的内部参考信号。其激发波长为575 nm，发射波长为602 nm，与多数qPCR仪器的光学系统兼容。此外，ROX Reference Dye具有良好的化学稳定性，能够在-20℃避光保存长达2年，短期使用时可在4℃保存。这种稳定性使其在实验中能够提供一致的荧光信号，减少因试剂变质导致的实验误差。性能优势校正孔间误差：qPCR实验中，由于加样量、孔位置、试管壁厚度等因素，不同孔之间的荧光信号可能存在差异。50× ROX Reference Dye能够通过校正这些非PCR相关的变化，显著提高定量的精确度。提高数据重现性：通过使用ROX染料对数据进行归一化处理，实验人员可以在较少的重复实验中获得更精确的结果，从而节省时间和资源。适用于多种仪器：50× ROX Reference Dye兼容多种主流qPCR仪器，如ABI 5700、7000、蛋白AG-微球菌核酸酶(pAG-MNase)在CRISPR-Cas9等基因编辑技术中，使用Pfu DNA Polymerase进行修复模板的合成。

T5核酸外切酶（T5Exonuclease）具有以下特点和技术应用：1.**降解方向**：T5核酸外切酶按照5'→3'方向降解双链或单链DNA。2.**起始消化位置**：T5核酸外切酶既能从单链或双链DNA的5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。3.**对超螺旋双链DNA的作用**：T5核酸外切酶无法降解超螺旋双链DNA。4.**单链DNA核酸内切酶活性**：T5核酸外切酶还具有单链DNA核酸内切酶活性。5.**应用领域**：-用于Gibson组装，这是一种在恒温条件下有效连接带有多个重叠序列片段的技术。-从完全连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物。-降解碱裂解质粒提取方法中产生的变性DNA，增加超螺旋DNA比例，提高DNA克隆和转染效率。-降解质粒样品中污染的线性化和切刻DNA。6.**操作条件**：推荐在37℃温育30分钟，之后加入EDTA至终浓度为20mM终止反应。7.**储存条件**：-25～-15℃保存，有效期3年。8.**注意事项**：避免起泡或剧烈搅拌、涡旋等操作，以防止本品失活。这些特点和技术应用使得T5核酸外切酶在分子生物学实验中，尤其是在DNA克隆和基因片段组装中，具有重要的应用价值。

在现代分子生物学研究中，实时荧光定量PCR（qPCR）技术已成为基因表达分析、病原体检测、基因拷贝数变异研究等领域的工具。而One Step RT-qPCR Probe Kit凭借其产品特点和性能，为科研工作者提供了一种高效、可靠的解决方案，极大地推动了相关研究的进展。一、产品特点（一）一步法操作One Step RT-qPCR Probe Kit采用独特的一步法反应体系，将逆转录（RT）和qPCR反应集成在一个反应体系中。这种设计极大地简化了实验操作流程，减少了人为操作误差和样本污染的风险。相比传统的两步法，一步法节省了时间和人力成本，还提高了实验的重复性和稳定性，尤其适合高通量样本的检测。（二）高灵敏度与特异性该试剂盒采用了先进的探针技术，结合优化的酶体系和反应缓冲液，能够实现对低丰度靶标基因的高灵敏度检测。其特异性探针设计确保了与目标序列结合，避免了非特异性扩增的干扰，从而为定量分析提供了准确可靠的数据支持。无论是对微量样本中的基因表达进行定量，还是对低浓度病原体进行检测，One Step RT-qPCR Probe Kit都能表现出性能。Pfu DNA Polymerase在基因克隆中的应用：Pfu DNA Polymerase常用于基因克隆，确保DNA片段的高精度复制。

在PCR产物的克隆中，Lambda核酸外切酶（λExonuclease）有其特定的应用和优势，但它不能完全替代其他酶。以下是一些替代酶和它们的特点：1.**ExonucleaseIII（ExoIII）**：-ExoIII具有3'→5'外切脱氧核糖核酸酶活性，尤其适合双链DNA的平末端、5'-突出末端或切口，从DNA链的3'-端释放5'-单磷酸核苷酸，产生单链DNA片段。-与Lambda核酸外切酶相比，ExoIII对具有3'-突出末端的DNA有活性，而Lambda核酸外切酶则对5'-磷酸化的双链DNA有更高的活性。2.**TaqDNA聚合酶**：-在平端克隆中，可以使用TaqDNA聚合酶和dATP进行“3'dA加尾”，以提高连接效率。-这种方法通过在PCR产物的3'端添加突出的腺嘌呤（dA），增加了与载体连接的可能性，从而提高克隆效率。3.**TOPO克隆载体**：-TOPO克隆载体含有共价连接的DNA拓扑异构酶I，可同时作为限制性内切酶和连接酶。-与传统PCR克隆载体相比，TOPO克隆载体具有更短的连接反应时间、更高的克隆效率以及更简单的分子克隆实验方案。综上所述，虽然Lambda核酸外切酶在特定情况下非常有用，但它不能完全替代其他酶。每种酶都有其独特的特性和应用场景，选择合适的酶取决于具体的克隆需求和实验设计。Ultra-Long Master Mix (2×)Without Dye是一种专为长片段PCR设计的预混液成分是一种经过热稳定Taq DNA聚合酶。Recombinant Mouse ALK Protein,hFc Tag

Ultra-Long DNA Polymerase能够扩增包含多个外显子的长基因片段，有助于揭示疾病的分子机制。Lactoferrin (17-41)

ExoIII（ExonucleaseIII）和Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在DNA末端处理上的主要不同点如下：1.**作用方向**：-**ExoIII**：具有3'→5'外切脱氧核糖核酸酶活性，它从DNA链的3'-OH末端逐步切去单核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**：是一种5'→3'核酸外切酶，能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**底物特异性**：-**ExoIII**：适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性，因此难以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**：适底物是5'磷酸化的双链DNA，对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低，不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**活性差异**：-**ExoIII**：对具有3'-突出末端(至少有4个碱基，且具有3'-末端C残基)的DNA、单链DNA、硫代磷酸酯连接的核苷酸无活性。-**Lambda核酸外切酶**：对5'-OH端的切割速度比5'-P端慢约20倍；对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。4.**应用场景**：-**ExoIII**：可以用于生产特定方向的单链DNA，将线性化DNA设计成为一端为不切割末端（3'突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或5'突出端）。