培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用:培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统,并采用开放培养,使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶,再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%) ,与培养基中的NaHCO3处于平衡状态,从而调节培养基的PH值。NEAA:非必须氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含几种非必需氨基酸的合剂,添加到的原培养基不同,NEAA 也有不同的种类,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。在实际应用过程中,常常需要调整培养基的组成和配方,以优化细胞或微生物的生长和功能表现。拉氧头孢溶液
合成培养基(synthetic medium) 由已知化学成分的营养物质组成的培养基。根据微生物对营养要求的不同,可完全由无机盐或化合物组成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、维生素等,其组成成分已知,只要严格操作,各批次间质量可做到稳定一致。此培养基可用来检测某种营养物或药物对微生物代谢的影响。组织细胞培养液均属合成培养基。合成培养基的成本较高,其价格相当于同类天然培养基的几倍以至于几十倍。只含几种无机盐的合成培养基,只适用于自养菌的培养,如培养亚硝化细菌、氧化硫杆菌等的培养基。有些培养基大部分成分为已知化学结构的营养物质,其中的个别或少数成分为未明化学成分的必须营养物,成为半合成培养基,如百日咳菌苗生产用的水解酪素培养基。萨氏液体培养基SDY培养基有些培养基需要添加血清或其它富含蛋白质的物质以促进生长。
氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分,氨基酸中有12种是细胞本身不合成的,必须由培养液提供。水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物,呈蛋黄色粉末状,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,微酸性。胶原是从动物真皮中提取的,具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。特殊培养基:包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基,除含营养成分外,还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势,如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型,由于胞内渗透压较高,故培养基必须采用高渗低琼脂培养基。
胰岛素(Insulin)作用普遍,包括调节脂肪和蛋白质的代谢以及促进细胞生长等。胰岛素功能的发挥源于其对细胞的作用,进而引起组织乃至机体的整体反应。一般可将胰岛素在细胞水平的作用分为三大类:代谢作用、促生长作用、以及代谢和促生长混合作用。胰岛素对细胞的代谢调节作用主要是通过其与细胞膜上的胰岛素受体(Insulin receptor, IR)相互作用而介导,而胰岛素对细胞的促生长作用则是通过其与细胞膜上胰岛素的样生长的因子受体(IGF Receptor, IG)相互作用而介导的。在无血清细胞培养液中,常添加胰岛素来维持细胞生长,调节细胞对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的摄取、利用和贮存,同时抑制糖原、蛋白质和脂肪的分解。培养基的配方也会受到环境、药物和其他外部压力的影响,因此,在实际应用中需要不断进行调整和改进。
1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知,便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代,因此,细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。动物血清成分复杂,各种生物大小分子混合在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效,但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限,成本高,限制了它的大量使用。无血清培养基不加动物血清,在基础培养基中加入细胞生长有效因子等。培养基通常由培养基粉末和水混合而成。改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)基础
液体培养基、固体培养基和半固态培养基是常用的培养基种类。拉氧头孢溶液
细菌培养基之牛肉膏琼脂培养基:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化钠0.5g,琼脂1.5g,水100ml在烧杯内加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2-7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌:1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15-30分钟。牛心培养基:取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。拉氧头孢溶液
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