在培养基中加入 HEPES 有何好处?培养基中常用的缓冲体系是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理 pH 条件下会降低缓冲能力。而HEPES 是一种很强的缓冲剂,能使细胞培养基在 pH7.2-7.6 条件下缓冲能力增强。HEPES溶液:是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境,CO2 气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。神经细胞原代培养的过程中能用到。在有些情况下,培养基还需要进行一些化学处理。果蝇培养基
细胞培养液(liquid of culture cellulae) 是指用于各种目的的体外培养、保存、运输活组织及细胞的液体,实质为人工模拟体内生长的营养环境,使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。由于其成分数量明确并可通过调节某一种成分来观察被研究对象的各种生物学改变,被广泛应用于细胞生物学科的研究。细胞培养液的组成成分主要有水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、生长因子等,这些成分必须通过严格挑选,严格测试后方可使用,所用的水必须达到2级试验用水(CB/T 6682-1992),所用的器皿必须清洁无污并进行高压灭菌或干烤去热源处理。卡那霉素溶液牛肉精蛋白胨培养基是常用的富营养培养基,适用于快速生长的微生物。
血清的主要成分血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。血清主要作用:提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。
天然培养基:天然培养基是指一类利用动物、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。例如。牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基和LB培养基等。常用的天然有机营养物质包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培养基成本较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。组合培养基:合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计而配制的培养基。例如,高氏1号培养基和查氏培养基等。合成培养基有一定的配方,配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其成本较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。液体培养基普遍应用于微生物菌株的生长、染色及细胞背景下的细胞培养等方面。
营养培养基(nutrient media) 在基础培养基中添加一些特殊的营养物质,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等,可供营养要求较高的细菌在其中生长。例如链球菌、肺炎链球菌等需在含血液或血清的培养基中生长;结核分枝杆菌的培养基中须添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。比较常用的营养培养基是血琼脂平板。增菌培养基(enrichment media) 一般为液体培养基,用于细菌的增菌培养,可泛用,也可专门用的,在专门用的增菌培养基中常含有目的菌生长所需要的特殊营养物质或生长因子。大多数细菌都能在富含有机物的基质中繁殖生长,因此有机培养基是基本的培养基之一。1%吐温80玉米琼脂培养基基础
某些培养基会在特定环境下产生特定的表型变化,例如MacConkey培养基生成红色菌落表示肠道杆菌的存在。果蝇培养基
培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。果蝇培养基
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