动物细胞培养必需的溶液,平衡盐水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羟乙基哌嗪乙烷磺酸)细胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液。1)青、链霉素,每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素。2)卡那霉素:终浓度为50ug/ml培养液。3)制霉菌素:浓度25U/ml,小瓶分装,每瓶一次用完。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清,前者来源少,价格高;后者要求刚产下尚未哺乳的小牛,因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。在培养细胞时通常还需要添加药物,以防止细菌污染。真杆菌选择性琼脂基础
培养基按成分分类有哪些?上海瑞楚生物科技有限公司小编介绍,根据培养基的组成成分,可分为天然培养基和合成培养基两大类。天然培养基(native medium) 含有不完全明了化学成分的天然物质。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米浆、血液、马铃薯等。用此类材料配成的培养基很难做到不同批号之间质量的稳定一致,因此在选用原料时务必注明其商品名称、生产厂家及批号,对不同来源的原料应先做小样试验。此种培养基成本较低,细菌繁殖较好,一般细菌培养以选用天然培养基为主。含铁牛奶培养基在实际应用过程中,常常需要调整培养基的组成和配方,以优化细胞或微生物的生长和功能表现。
还有一些鉴别性培养基,是利用细菌特有的各种酶系统,能分解利用各种特定的糖、醇、氨基酸或其他基质而产酸、产气、产碱或产生其他可见物质,依此进行细菌的鉴别,例如常用的生化培养基。用于细菌生化特性试验的培养基特点是在无糖的基础培养基中加人某种特定的基质,并加人指示剂,细菌在此类培养基中的一系列生化反应结果,均通过指示剂显示出来。此类培养基为生化反应鉴别培养基。根据用量又可分为常量生化培养基和微量生化培养基。值得注意的是生化试验培养基的某些成分受高温、pH等诸多因素的影响,在配制和使用时,应根据实际情况严格掌握,防止有效成分被破坏,以保障其使用效果。
培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。需要控制pH值、温度、气氛等因素,以保证培养基的稳定性。
培养基的分类有几种呢?上海瑞楚生物科技有限公司小编介绍,按培养基的物理状态区分:1.液体培养基,80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。2.固体培养基,一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。3.半固体培养基,指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。4.脱水培养基,又称预制干燥培养基,指含有除水分外的一切成分的商品培养基。有些培养基需要添加血清或其它富含蛋白质的物质以促进生长。硫乙醇酸盐流体培养基 (FT) ChP/USP
好氧菌需要富含氧气和富含葡萄糖的培养基,而厌氧菌则需要采用无氧培养技术。真杆菌选择性琼脂基础
天然培养基血清种类:目用于组织培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因:来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。牛血清是细胞培养中用量比较大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质比较高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分较少。真杆菌选择性琼脂基础
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