对Genovis的ImpaRATOR处理的样品的分析表明,ImpaRATOR很好地消化了所有三种底物并产生了相似的糖肽,但预期的聚糖种类不同。用ImpaRATOR处理的样品比其他样品含有更多的变异,因为每种肽都检测到多种聚糖结构。观察到的聚糖种类主要是单唾液酸化和二唾液酸化he心1结构,这与依那西普的预期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO预处理样品均产生具有裸核1结构的肽,但携带在ImpaRATOR消化样品中观察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 预处理,然后用 ImpaRATOR 消化,得到含有 Tn 抗原的肽。总之,这些数据证明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR处理的依那西普显示出与相应的去唾液酸化OpeRATOR处理样品略有不同的消化模式。例如,OpeRATOR在两个O-糖基化氨基酸之间消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱(数据未显示)。SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后,应用GalNAcEXO酶去除剩余的GalNAc残基。高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶

GlycOCATCH®亲和纯化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽亲和纯化的富集树脂。GlycOCATCH亲和纯化以方便的离心柱形式提供。该产品包含:4 个 GlycOCATCH 亲和纯化微离心柱,每个柱能够结合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(总共 200 μg)。Genovis的SialEXO 冻干 200 单位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 冻干 200 单位,用于结合的 O-糖蛋白的可选洗脱方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 复杂样品的特异性净化;3. 用于改进 MS 分析的样品制备。O-糖基化蛋白和肽的特异性富集:O-连接聚糖参与多种生物过程,包括抑制病原体引起的gan染、炎症反应、造血和细胞信号传导。高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。

GlycOCATCH设计用于特异性结合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。亲和树脂基于无活性的Genovis的OpeRATOR酶,该酶经过工程设计,可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。 结合在pH 5-8的生理缓冲液中进行。由于GlycOCATCH树脂和O-糖蛋白/肽之间的强相互作用,可以用8M尿素进行洗脱。或者,可以使用活性OpeRATOR酶进行洗脱,该酶消化O-聚糖位点的N末端结合的O-糖蛋白。在后一种情况下,肽在天然条件下回收。OpeRATOR 冻干酶包含在购买中。由于 O-糖蛋白上的旋亚氨酸化 O-聚糖与树脂结合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 冻干也包含在购买中。
从依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖:Genovis的GalactEXO Immobilized 对 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖均具有酶活性,这些半乳糖存在于装饰有 N- 和 O-连接糖基化的生物制药中,例如 Fc-融合蛋白依那西普。将依那西普与GalactEXO固定化孵育60分钟,并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亚基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分别分析。与GalactEXO Immobilized孵育导致N-连接和O-连接聚糖上的半乳糖残基水解,这在半乳糖基化物种中被视为信号丢失。对游离的N-聚糖分析证实了LC-MS数据。依那西普是一种 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的铰链区域。

用于离心柱中糖蛋白去胶基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FucosEXO酶,用于糖蛋白的去氟糖基化,而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去胶基化。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. z终样品中不含酶。有效去除α1-2,3,4连接岩藻糖:分析用复杂聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶学工具。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖残基,无需辅助因子或添加唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。SialEXO酶可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。甘肃高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
曲妥珠单抗Fc N-糖可以表征游离N-糖以及去糖基化抗体的功能和结构。高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶
FucosEXO中的酶在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然条件下水解糖蛋白上的岩藻糖,在6至8的pH值范围内显示出高活性,无需辅助因子或添加剂。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程;4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集:GlycOCATCH还可用于从复杂的样品混合物(如人血清)中选择性富集O-糖基化蛋白。简而言之,用Genovis的SialEXO处理血清并应用于GlycOCATCH树脂。洗涤树脂,用8M尿素洗脱O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化样品并使用 RP-LC-MS/MS 进行分析,并使用 Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。O-糖基化蛋白以黄色表示。高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶
genvois的OpeRATOR 是一种内切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基...
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