单核细胞活化反应测定（MAT）是近年来热原检测领域的突破性技术，其原理基于人体免疫系统对热原的天然应答机制：人源单核细胞（如 THP-1 细胞系或新鲜人全血单核细胞）在热原刺激下，会活化胞内炎症信号通路，释放 IL-6、TNF-α 等促炎细胞因子，通过 ELISA 检测细胞因子的浓度，即可间接反映样品中热原的总量与活性。与传统检测方法相比，MAT 法具备三大不可替代的优势：一是广谱性，可同时检测细菌内毒素、病毒、真菌毒素、支原体等所有类型热原，填补了鲎试验法只能检测内毒素的 “非内毒素热原盲区”，尤其适用于疫苗、基因治疗产品等易受多种热原污染的高风险产品；二是人源相关性，采用与人体同源的细胞模型，检测结果更贴近临床实际热原反应，避免家兔试验中动物种属差异导致的误判；三是高灵敏度，对细菌内毒素的检测限可达 0.0125EU/mL，对非内毒素热原（如酵母多糖、腺病毒）的检测限低至 ng/pg 级，满足低限值产品的质控需求。
与传统方法相比，MAT 法能更覆盖各类热原，保障产品安全性。北京疫苗热原检测技术服务
欧盟在热原检测方法选择上，以动物保护和检测准确性为导向，形成明确的法规倾向。首先，欧盟禁止家兔法（PRT 法）这类动物实验，要求采用替代方法，单核细胞活化试验（MAT 法）因符合 3R 原则（替代、减少、优化），被纳入欧洲药典（EP2.6.30），成为热原检测的主流替代方法。其次，对于鲎试剂法，欧盟虽未禁止（因其属于鲎血提取而非动物实验），但出于鲎资源保护考量，推荐使用重组 C 因子法（EP2.6.32），该方法无需依赖鲎血，通过基因工程技术制备试剂，避免资源衰减与生态争议。此外，美国药典（USP）和日本药典（JP）也同步推荐重组试剂（含重组级联试剂 rCR），形成国际法规协同趋势。需注意的是，欧盟对热原检测的要求是 “重点全场景覆盖致热物质”，MAT 法因能同时检测内毒素与非内毒素热原，重组 C 因子法因特异性高（无 G 因子干扰），均符合其法规逻辑，而传统鲎试剂法需额外关注 β- 葡聚糖假阳性问题，复杂基质样品需加做干扰验证。
上海抗体药物热原检测单核细胞活化反应测定法保持细胞活性稳定，是实现准确热原检测的基础条件。
MAT 法热原检测标曲采用非倍比稀释，而非 1-0.5-0.25 的倍比稀释，主要优势在于提升标曲准确性与适用性，避免稀释误差影响。一是可密集覆盖关键浓度区间：热原检测的重点关注区为低浓度拐点（如 0.0125-0.1EU/mL）与高浓度平台区（如 0.5-1EU/mL），非倍比稀释可在这些区间设置更多浓度点（如 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1EU/mL），提升曲线拟合精度，而倍比稀释低浓度点少，易导致低浓度热原定量不准。二是降低稀释误差累积：倍比稀释需连续稀释（如 1EU/mL→0.5EU/mL→0.25EU/mL），每一步误差会累积，导致低浓度点实际浓度偏离理论值；非倍比稀释通过单独配制每个浓度点（如直接用标准品配制 0.025EU/mL），避免误差累积，提升标曲可靠性。三是适配不同样品浓度：非倍比稀释可根据样品预期浓度调整标曲范围，如样品预期浓度 0.05EU/mL，可增加 0.025、0.05、0.1EU/mL 点，确保样品浓度落在标曲线性区，而倍比稀释范围固定，灵活性差。这些优势使非倍比稀释成为 MAT 法标曲配制的优先选择方式。
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒（MAT法）已完成 25 个品种样品的检测验证，覆盖单抗类、疫苗类、基因工程类、血液制品类、生化药品类与注射液，结果显示其适配性范围广但需关注部分样品的干扰。疫苗类（如麻腮风联合减毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程类（重组人促红素、干扰素 α-2b）、血液制品类（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）与注射液（生理盐水、琥珀酰明胶）的加标回收率均在 50%-200% 范围内，无明显干扰，检测结果可靠。单抗类（如贝伐珠单抗、阿达木单抗）、中药注射液等样品虽存在不同程度的抑制作用，需通过提高稀释倍数（如稀释至 MVD 上限）、超声处理或添加中和剂消除抑制，优化后回收率均可达标。此外，MAT 法可有效检测非内毒素热原，如对贝伐珠单抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分别达 113%、66.8%，证明其可解决传统鲎试剂漏检非内毒素热原的问题，尤其适用于高风险生物制品的热原防控。
在药品安全语境中，热原特指细菌性热原—微生物代谢产物、细菌尸体及内毒素的统称。
中国药典与欧洲药典对 MAT 热原检测的细胞类型及复孔数有明确要求，且存在细节差异。细胞类型上，两者均认可人全血、PBMC（外周血单个核细胞，至少 4 个供体，欧洲药典建议 8 个供体），中国药典明确将单核细胞系纳入，欧洲药典则要求单核细胞系需做支原体污染检测、细胞鉴别等；检测方法均为 “热原刺激细胞 + ELISA 检测 IL-6/IL-1β/TNF-α”。复孔数方面，两者均规定平行孔≥4、浓度点≥4，中国药典额外要求标曲 r≥0.90，主要目的是通过多重复孔抵消 PBMC 的不稳定性，确保热原检测结果准确可靠。
选择热原检测单核细胞活化反应测定法，即是选择更准确、更安全、更可持续的检测方案。黑龙江热原检测技术服务
PBMC（外周血单个核细胞）用于 MAT 检测时供体差异大，IL-6 释放波动明显，标准化难度高于单核细胞系。北京疫苗热原检测技术服务
MAT法（单核细胞活化反应测定）热原检测基于人体免疫反应机制设计，原理是：内毒素（革兰氏阴性菌来源）与非内毒素热原（革兰氏阳性菌、霉菌、病毒等来源）进入人体后，会活化单核细胞或单核细胞系，使其释放 IL-6、IL-1、IL-1β、TNF-α 等促炎细胞因子。检测时将供试品与单核细胞 / 单核细胞系共孵育，再通过 ELISA 定量检测释放的 IL-6 含量，结合内毒素标准品绘制的标曲，即可判断供试品中热原含量是否符合规定，实现内毒素与非内毒素热原的全覆盖检测。
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