江苏重组蛋白内毒素检测

湖州申科重组级联试剂（rCR）在关键性能指标上表现优异，满足内毒素检测的严苛要求。灵敏度方面，其检测范围覆盖 0.005-5EU/mL，可准确捕捉微量内毒素残留，适配基因治疗、血液制品等低限值需求场景。标准曲线线性良好，R²≥0.990，确保定量结果的准确性。反应效率上，rCR 只需 60 分钟即可完成检测，较部分竞品的 90-120 分钟大幅缩短，提升检测周转效率。抗干扰性实验显示，对细胞培养辅料、300g/L 葡萄糖、FBS 血清、单抗等 8 类复杂样品，rCR 在较低稀释倍数下加标回收率可达 70%-175.4%，优于重组 C 因子法。批间一致性方面，多批次试剂检测同一样品的 CV 值≤15%，稳定性远超行业平均水平，为长期质控提供可靠保障。

鲎试验法（LAL 法）是细菌内毒素检测的经典方法，依据反应监测方式可分为三类：凝胶法、浊度法和显色法。凝胶法通过观察是否形成凝胶判断内毒素是否超标，其优势是操作简便、成本较低，适用于定性或半定量检测，如医疗器械初筛；浊度法通过监测反应体系浊度变化速率定量内毒素，灵敏度高（可达 0.005 EU/mL），适用于生物制品原液等高精度需求场景；显色法基于显色底物的吸光度变化定量，抗干扰能力较强，适配复杂基质样品（如含蛋白质的注射液）。三种方法均需严格控制反应温度（37℃±1℃）和时间，确保结果可靠性。

重组级联试剂（rCR）通过完整模拟天然鲎试剂的酶促级联反应路径，实现高效且特异的内毒素检测。其反应机制为：内毒素首先活化重组 C 因子，活化的 C 因子进一步活化重组 B 因子，随后活化重组凝固酶原转化为凝固酶，再催化显色底物产生黄色信号（405nm 波长可检测）。这一级联放大过程有效提升了检测灵敏度，即使微量内毒素也能产生可识别信号。与单因子的重组 C 因子法（rFC）相比，rCR 的多因子级联反应抗干扰能力更强，尤其对复杂基质样品（如高蛋白单抗、疫苗）表现更优。同时，rCR 剔除了天然鲎试剂中的 G 因子，避免了与 β-D 葡聚糖的非特异性反应，从根本上减少假阳性结果，保障检测数据的可靠性。

实验数据充分证明，内毒素检测重组级联试剂（rCR）与天然鲎试剂的检测结果具有高度等效性，可实现方法无缝切换。对细胞培养辅料、冻干甲型肝炎疫苗、单抗 A/B 等 8 类代表性样品的平行检测显示，rCR 的检测平均值为 0.001-0.026EU/mL，天然鲎试剂为 0.002-0.034EU/mL，两者偏差≤0.003EU/mL。加标回收率方面，rCR 为 70%-175.4%，天然鲎试剂为 82.2%-156.6%，均处于 50%-200% 的合格范围。批内精密度上，rCR 的 CV 值为 0.524%-14.716%，天然鲎试剂为 0.908%-12.348%，均满足法规对精密度的要求。这种等效性确保了实验室在切换至重组试剂时，历史数据和工艺控制标准的连续性，降低方法转换风险。

低内毒素回收（LER）的主要形成机制之一是螯合剂与非离子表面活性剂的协同作用，直接影响内毒素检测结果。第一步，样品中的螯合剂（如柠檬酸盐）会去除二价阳离子（Mg²⁺、Ca²⁺），削弱 LPS 聚集体的盐桥结构，降低其刚性；第二步，表面活性剂（如吐温 20）嵌入 LPS 分子，形成混合聚集体（胶体、层状结构），改变 LPS 的超分子形态。LPS 从 “可检测态” 转为 “不可检测态”，导致鲎试剂中的 C 因子无法与内毒素结合，内毒素检测出现假阴性。这种变化是时间依赖的，与稀释度无关，给常规内毒素检测带来独特挑战。

当实验室更换内毒素检测方法或更换试剂供应商时，需进行方法比对与桥接验证。比对实验需选取至少 3批代表性样品，分别用新旧方法检测，计算结果相关性（如相关系数 R²≥0.95）和偏差（≤20%）。桥接验证还需评估新方法的特异性、灵敏度是否与旧方法一致，如确认对高风险样品（如含 β- 葡聚糖的样品）的抗干扰能力相当。若方法变更涉及法规申报产品，需将验证数据纳入申报资料，证明变更后方法仍能有效控制内毒素风险，符合 FDA、NMPA 等监管机构对方法变更的合规性要求。