浙江合规性内毒素检测技术升级

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜释放的脂多糖（LPS）成分，具有极强的生物活性，微量即可引发人体发热、休克甚至多脏器功能衰竭。因此，在生物制品、医疗器械、制药用水等领域，细菌内毒素检测是保障产品安全性的关键质控环节。其检测原理基于内毒素与特定试剂的特异性反应：内毒素可活化鲎血变形细胞裂解物（LAL）中的凝血级联反应，通过C因子通路触发酶促反应，通过观察凝胶形成、浊度变化或显色强度实现定量或定性分析。目前，各国药典均将内毒素检测列为强制要求，以降低临床应用中的热原风险。

湖州申科生物重组级联试剂（rCR）采用基因工程技术合成，完全模拟了天然鲎试剂中的酶促级联放大反应。重组鲎试剂反应体系中包含重组C因子、重组B因子和重组凝固酶原。当供试品中存在内毒素，重组C因子识别内毒素后活化，会依次级联活化下游重组B因子和重组凝固酶原。凝固酶原转化为具有生物活性的凝固酶后，识别并催化下游带显色基团的底物产生显色反应。显色反应的强度和内毒素浓度成正相关，从而定量检测内毒素。本产品用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样品中的细菌内毒素的含量。

医疗器械（如输液器、注射器、植入式设备）若携带内毒素，可能通过血液、组织接触引发异常反应或炎症反应。其检测需遵循 “模拟临床使用” 原则：采用浸提液（如 0.9% 氯化钠溶液或注射用水）在 37℃±1℃下浸提器械表面内毒素，再通过 LAL 或 rFC 法检测浸提液。不同器械的内毒素限值差异明显：一次性输液器需≤0.5 EU/device，植入式心脏瓣膜则要求更严格（≤0.06 EU/device）。检测时需注意器械材质对浸提效率的影响，如塑料类器械可能吸附内毒素，需优化浸提时间（通常≥1 小时）或采用超声辅助提取，确保残留内毒素被充分检出。

重组试剂（rCR、rFC）是解决 LER 的重要工具，优化内毒素检测性能。重组鲎试剂（rCR）通过基因工程表达 C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模拟天然鲎级联反应，灵敏度达 0.005EU/mL，与天然方法桥接容易，能避免 LPS 结构变化导致的假阴性；重组 C 因子（rFC）灵敏度 0.005-5EU/mL，性状稳定、均一性好，虽需荧光酶标仪，但对部分 LER 场景（如无蛋白质干扰）适配性强。二者摆脱了天然鲎试剂的局限，为内毒素检测提供更抗 LER 的选择，契合行业技术趋势。

湖州申科针对 LER 提供多平台内毒素检测解决方案，适配不同成因的 LER 问题：一是鲎试剂配套增强剂，通过添加分散剂、过量二价阳离子，改善 LPS 聚集体状态，提升回收率；二是重组鲎试剂（rCR），无 G 因子干扰，完全模拟天然鲎级联反应，灵敏度达 0.005EU/mL，易与天然方法桥接；三是重组 C 因子（rFC），灵敏度 0.005-5EU/mL，性状稳定，适配特定基质；四是 单核细胞活化反应测定（MAT)法，通过检测 IL-6 覆盖全热原，不受 LPS 结构变化影响；五是质谱技术，验证基质残留对检测的干扰。多平台协同确保内毒素检测准确可靠。

样品中的高渗透性成分（如高浓度盐、糖）会通过改变反应体系渗透压，抑制鲎试剂反应，影响内毒素检测结果。例如，浓度为 70% 的葡萄糖溶液、高浓度氯化钠溶液等，会形成高渗透压环境，导致鲎试剂中的蛋白质脱水变性，丧失酶活性，进而使内毒素无法被正常检测，出现假阴性。这类高渗透性基质的干扰机制明确 —— 通过破坏蛋白质结构影响酶促反应，且干扰程度与浓度正相关。为消除这类干扰，解决方案是使用内毒素检查用水稀释样品：根据样品渗透性高低，逐步稀释至适宜浓度（通常需稀释至渗透压与生理盐水接近），降低对蛋白质的脱水作用，恢复鲎试剂中酶的活性。稀释过程中需注意，稀释倍数需在方法验证确定的 “无干扰稀释范围” 内，避免因过度稀释导致内毒素浓度低于检测限，确保内毒素检测既能规避高渗透性抑制，又能准确捕捉微量内毒素。