江苏生物制品内毒素检测鲎试剂

血液制品（如白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子）来源于人血浆，内毒素污染风险高，且基质中含大量蛋白质、脂质等干扰物质，检测难度较大。传统 LAL 法易受血浆蛋白抑制，需通过预处理去除干扰：如采用三氯乙酸沉淀蛋白、超速离心分离脂质，或使用特定去干扰试剂（如内毒素提取试剂）。此外，血液制品内毒素限值较低，需选用高灵敏度检测方法（如动态显色法，LOD=0.005 EU/mL）。检测过程中需严格区分 “内源性内毒素”（血浆中天然存在）与 “外源性污染”，通过工艺优化（如巴氏灭活、纳米膜过滤）降低外源性内毒素残留，保障临床用药安全。

重组级联试剂作为内毒素检测鲎试剂的理想替代方案，其具备的优势有：①优化的G因子级联反应，无G因子旁路干扰。采用基因重组技术表达鲎血细胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），无G因子旁路干扰，排除1，3-β-D葡聚糖假阳性风险。②依然采用动态显色法原理，可沿用天然鲎试剂检测设备。重组级联试剂（rCR）,与天然鲎（动态显色法）具有相同的操作流程、检测设备、分析方法，用户可以沿用天然鲎的仪器、软件、耗材、人员培训、验收程序等，无需投入额外成本。③具有与天然鲎的相同反应机制，检测结果具有等效性。完全模拟了天然鲎试剂的酶联反应，由3种蛋白组成的级联反应机制提供了信号放大的过程，确保了检测的准确性和灵敏度。湖州申科按照药典要求进行替代方法验证，无缝衔接技术转移，助力用户从方法验证到工艺落地，从数据合规到全球申报。

实验数据充分证明，内毒素检测重组级联试剂（rCR）与天然鲎试剂的检测结果具有高度等效性，可实现方法无缝切换。对细胞培养辅料、冻干甲型肝炎疫苗、单抗 A/B 等 8 类代表性样品的平行检测显示，rCR 的检测平均值为 0.001-0.026EU/mL，天然鲎试剂为 0.002-0.034EU/mL，两者偏差≤0.003EU/mL。加标回收率方面，rCR 为 70%-175.4%，天然鲎试剂为 82.2%-156.6%，均处于 50%-200% 的合格范围。批内精密度上，rCR 的 CV 值为 0.524%-14.716%，天然鲎试剂为 0.908%-12.348%，均满足法规对精密度的要求。这种等效性确保了实验室在切换至重组试剂时，历史数据和工艺控制标准的连续性，降低方法转换风险。

湖州申科生物重组级联试剂（rCR）采用基因工程技术合成，完全模拟了天然鲎试剂中的酶促级联放大反应。重组鲎试剂反应体系中包含重组C因子、重组B因子和重组凝固酶原。当供试品中存在内毒素，重组C因子识别内毒素后活化，会依次级联活化下游重组B因子和重组凝固酶原。凝固酶原转化为具有生物活性的凝固酶后，识别并催化下游带显色基团的底物产生显色反应。显色反应的强度和内毒素浓度成正相关，从而定量检测内毒素。本产品用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样品中的细菌内毒素的含量。

低内毒素回收（LER）与传统鲎试剂干扰（抑制 / 增强）在多维度存在差异，准确区分对优化内毒素检测至关重要。表现上，LER 是内毒素回收率＜50%，传统干扰是反应抑制或增强；成因上，LER 由螯合剂 + 表面活性剂协同或蛋白质电荷结合引发，传统干扰因 pH、β- 葡聚糖等导致；排除方式上，LER 时间依赖且无法稀释解决，传统干扰浓度依赖且可通过稀释缓解；确认方法上，LER 需通过保存时间研究（HTS），传统干扰按药典干扰实验评估。明确这些区别能帮助企业排查内毒素检测异常，避免误将 LER 当作普通干扰处理。

内毒素检测法规体系正逐步向非动物源试剂倾斜，为重组试剂的应用铺平道路。美国药典（USP）已将重组 C 因子（rFC）和重组级联试剂（rCR）正式收录，于2025 年 5 月纳入 USP-NF，明确要求用户验证重组试剂对特定产品的适用性。欧洲药典（EP）通则 2.6.32 已收录重组 C 因子法，规定注射用水和纯化水可直接采用该方法检测，复杂基质样品需通过验证后使用。日本药原则通过指导原则<G4-4-180>将重组蛋白试剂列为内毒素检测的补充方法。中国药典虽暂未正式收录重组方法，但 9251《细菌内毒素法应用指导原则》为其应用提供了框架。这些法规进展共同构建了重组试剂的合规应用基础。