宁波成都RNA提取试剂

动物细胞RNA提取：1、悬浮细胞：可直接离心后弃掉培养基，用无菌PBS清洗1~2遍后，再用适量PBS悬浮起来，然后再加入裂解液进行裂解。千万不要完全弃掉液体后，往沉淀细胞里直接加入裂解液，这样会使外表层的细胞裂解后释放的组蛋白包裹粘附在沉淀细胞外侧，从而限制沉淀内部的细胞与裂解液的接触，从而导致细胞裂解不彻底，降低RNA得率。2、半贴壁或贴壁不紧的细胞：弃掉培养基后，用PBS洗1~2次，然后直接吸取适量PBS用吸管或者泵吹打培养皿，把细胞吹下来，转移到无RNA酶的EP管中，加裂解液进行提取。3、贴壁细胞：需要先用胰酶消化，然后收集到无RNA酶的EP管中，离心去其上清，用PBS洗1~2次，去除多余的胰酶，以适量PBS重悬后继续进行提取步骤。RNA提取：无论是从细胞、血液、还是组织等高难度样本提取RNA。宁波成都RNA提取试剂

通用多糖多酚植物RNA提取试剂盒自主研发生产，博取众家之长，根据多年来市场反馈不断进行技术升级和改良得来。具有操作步骤少，实验快捷，RNA产量纯度高，充分满足后续实验要求的需要，适用提取样品普遍等特点。产量：每100mg样品提取的RNA平均值在20-50ug不等。纯度：OD值一般在1.9以上。得到的RNA无DNA污染，可直接用于反转录，实时荧光定量PCR（尤其对RNA溶液中DNA非常敏感）等所有后续实验。1、快速：多糖多酚植物RNA提取试剂盒提取RNA的整个实验操作步骤简化快捷从时间因素考量上较大限度的防止RNA在提取中的降解（一般样品十多分钟就能完一个样RNA的提取，较大缩短了一般试剂盒提取所需要的半小时甚至更长的时间，）。2、高产量：多糖多酚植物RNA提取试剂盒拥有较强细胞裂解液，保证后续RNA提取的得率。（能完全通过化学方法彻底裂解细胞让RNA释放完整，并且有效成分能压制内源RNA酶的降解作用）宁波成都RNA提取试剂mRNA是依据DNA序列转录而成的蛋白质合成模板。

总RNA提取试剂，适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提，可有效防止RNA在提取过程中的降解。获得的RNA可直接用于Northern杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase保护实验，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。该试剂可用于100次总RNA提取（10平方厘米细胞或100mg组织）。总RNA提取试剂注意事项：1，RNA提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无RNA酶。操作中应小心，防止外源性RNA酶污染样品导致RNA样品降解。2，试剂中含有酚等有害物质，注意个人防护。自备新开封或专门氯仿，异丙醇，75%乙醇，DEPC处理水。

总RNA提取试剂是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围普遍，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在总RNA提取试剂中被充分裂解的同时能够较大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、体外翻译等。RNA提取试剂：在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。

提取RNA的详细步骤：首先，将研钵晾干够，倒入1/3体积的液氮，加入0.2g均质的植物材料，充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中，摇匀。然后，加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀，加入300微升酸酚摇匀，加入100微升的氯仿摇匀。然后，在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟，吸取上清液的3/4，加入等体积的异丙醇，于冰上放置十五分钟。然后，在四摄氏度12000r/min下离心十分钟，将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中，于-20摄氏度下放置过夜。然后，在4摄氏度13000r/min下离心10-15min，将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中，加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚，摇匀，进行抽提，在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀，进行抽提，在四摄氏度13000r/min下离心五分钟，上清液中加入1/10体积3mol/lNaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。能迅速破碎细胞，压制细胞释放出的核酸酶。宁波成都RNA提取试剂

血浆/血清RNA提取试剂盒：可以从普通植物的根、茎、叶中快速提取总RNA。宁波成都RNA提取试剂

细胞RNA提取的方法：实验提取步骤：标准Trizol提取步骤为液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上，加入Trizol裂解5-10分钟，用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿，上下混匀液体，4度静置10-15分钟。（氯仿为有机溶剂，有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和RNA脱离，RNA进入水相）。4度离心15分钟，一定注意选择低温离心。离心后分成三层，RNA在上清里，从离心机轻轻拿出EP管，以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔，切忌吸取太多，一般吸到400-500ul，避免吸到下层沉淀，将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇，4度静置10min，然后12000rpm离心10min。宁波成都RNA提取试剂