上海ELISA法宿主细胞蛋白（HCP）残留检测桥接验证

美国药典 <1132> 与欧洲药典 < 2.6.34 > 建议，对即将进入商业化生产（临床 III 期及后续阶段）或生产工艺已稳定的生物制品，采用定制化 ELISA 试剂盒开展宿主细胞蛋白（HCP）残留检测，背后原因主要包括四点：①确保检测方法能充分覆盖实际工艺产生的 HCPs，防止漏检关键杂质；②为更准确的免疫原性与安全性评估提供支持；③提供真实的工艺表征数据，而非推测性数据；④满足商业化生产质量控制对方法一致性的要求。此外，研究人员对当前市场常见的 HCP ELISA 商业化试剂盒进行测试，并将其与 HCP ELISA 定制化试剂盒对比。实验结果显示，不同商业化试剂盒检测同一样品的数值差异明显，且准确性均低于定制化试剂盒 —— 这一结果表明，定制化试剂盒更能满足产品质量控制的实际需求。

宿主细胞残留蛋白（HCP）检测是生物制品质量控制的关键环节，当前主流技术为基于抗体的免疫学方法（如 ELISA）。但实际检测中，不同试剂盒的结果常存在明显偏差，关键问题源于其两大关键组分 ——HCP 校准品与检测抗体 —— 在制备及表征上的高度可变性。作为定量基准的校准品，自身复杂性极高。不同供应商制备时，所用细胞来源、培养及表达条件存在明显差异，且宿主蛋白的提取纯化工艺（如目标产物去除策略）也各不相同，这些差异直接导致校准品的组成、对实际样品的代表性及储存稳定性千差万别。检测抗体（尤其是多克隆抗体）需通过免疫动物获得，其特异性与 HCP 覆盖度受多重因素影响：免疫原的选择、动物个体免疫应答差异、免疫方案设计，以及后续抗体筛选与纯化流程，都会让不同批次或来源的抗体，在对不同 HCP 的亲和力、对低丰度蛋白的检测灵敏度等识别谱特性上，形成本质区别。

HEK293细胞源自人胚肾细胞，在细胞与基因治疗领域应用较广，例如用于病毒载体生产等。尽管生物制品会经过多步纯化工艺去除相关杂质，但微量残留的宿主细胞蛋白（HCP）仍可能引发机体免疫应答，进而影响产品质量与安全性。因此，需对生产工艺中残留的HEK293 HCP开展定量检测，确保其符合产品放行标准。湖州申科生物的HEK293 HCP残留检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法），适用于对HEK293及HEK293T来源生物制品（如重组蛋白类、细胞和基因治疗类等）中的宿主细胞蛋白进行定量检测。该试剂盒检测步骤少、速度快，且具备专一性强、性能稳定可靠的特点。

大肠杆菌具有遗传背景明确、便于培养与调控、蛋白表达量高、成本低廉且培养周期短等特点，是性价比高的蛋白表达系统。其中，K-12系列与B系列菌株是工业级生物工程中常用的大肠杆菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大规模生产质粒DNA，进而制备细胞基因治疗产品与病毒载体类疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更适合高效转染表达载体及常规蛋白的表达，例如病毒蛋白、重组蛋白疫苗、细胞因子、酶类等产品。湖州申科生物依据这两种菌株的特性，分别研发了大肠杆菌表达菌HCP残留检测试剂盒与大肠杆菌克隆菌碱裂HCP残留检测试剂盒。

湖州申科生物在宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 检测技术领域具备扎实的技术积累，已搭建起高质量、全流程的自主开发平台，覆盖 HCP 检测试剂盒研发的关键环节：①抗原表征与制备：依托合规平台具备 HCP Reference/Antigen 制备能力，借助 2D 凝胶电泳等先进技术保障抗原库的代表性；②动物免疫与抗体制备：凭借自有免疫动物平台，把控免疫原设计及动物免疫过程，产出高特异性、广覆盖度的抗体；③体系开发与验证：依靠成熟技术经验开发高灵敏度、高稳定性的检测体系，并严格遵循 GMP 标准完成方法学验证。该平台通过全流程自主可控的技术整合，从源头保障试剂盒性能的一致性与可靠性，大幅降低不同批次试剂盒的检测变异性。其研发的 HCP ELISA 试剂盒已服务国内外 200 余家生物医药企业，为单抗、疫苗等生物制品的工艺开发、质量控制及 IND/BLA 等法规申报，提供符合监管标准的定制化检测方案。

宿主细胞蛋白（HCP）多与细胞关键功能相关，像细胞增殖、基因转录、蛋白合成修饰、细胞存活及凋亡等，工艺过程中会通过细胞分泌，或因细胞死亡、裂解而释放。生产环节中，主要有三方面因素影响HCP的组成与丰度：①宿主细胞基因组调控及培养工艺：特定工艺下潜在HCP数量可能极多，且并非所有基因都会表达，部分基因的表达存在时间与条件差异；例如大肠杆菌约含4300个基因，不同工艺产物会经历独特的翻译后修饰，增加HCP的总数与生化复杂性。研究表明，大肠杆菌表达的蛋白存在数量差异，这可能是对环境条件的适应性反应，但85-90%有潜在免疫原性的HCP在不同发酵过程中均会出现。②产物表达方式：宿主细胞与外源基因、载体及辅助成分构成的体系，可实现稳定、瞬时及诱导表达；以大肠杆菌为例，常见的表达形式包括胞内表达、分泌表达、可溶性表达、不溶性包涵体形式，以及融合与非融合表达。③纯化步骤及产品自身特性：纯化过程中能去除99%以上的HCP，但仍有残留HCP保留在产品中，这些残留HCP可能与产品结合，随产品一同完成纯化。