HEK293宿主细胞蛋白（HCP）残留检测抗体制备

美国药典（USP）1132 章节中，推荐的 HCP 抗体纯化方式有两种，分别是 Protein A/Protein G 亲和柱层析法与 HCP 抗原亲和柱层析法。这两种方法各有特点与不足，且均满足监管层面的要求。在实际应用场景中，针对不同产品，两种方法可能造成检测结果的差异。两种方法所获抗体的关键差异，在于 HCP 抗体有效含量的占比不同。其中，HCP 抗原亲和柱层析法的有效含量占比明显更高，但该方法存在部分 HCP 抗体流失的情况，这会使得针对特定样本的检测结果低于前者，因此企业在实际建立检测方法时，需开展充分评估。此外，HCP 抗原亲和柱层析法对纯化工艺的要求更为严格，若要确保抗体的批间一致性，需重点考察 HCP 抗原柱的制备工艺、柱子的使用寿命以及再次制备时的一致性等关键问题。

操作规范是影响宿主细胞蛋白（HCP）残留检测结果的关键因素之一。一方面，实验人员的专业能力与实操经验会影响检测结果的准确性，熟练人员可准确完成样品处理、试剂配制及仪器操作，降低人为误差。另一方面，科学的HCP检测方法在开发与应用阶段，需纳入操作的合理变动区间（即耐用性）并配套质控措施，从流程层面较大程度规避人为误差对结果的干扰。此外，严格遵照标准操作流程（SOP）是保障检测结果可靠性的关键，操作步骤不规范易造成结果重复性不佳或误差扩大。目前，湖州申科已正式推出全自动HCP ELISA检测系统，可完成样品制备、孵育、洗板到数据采集的全流程操作，搭配实验室信息管理系统（LIMS），能实现“输入即输出”，降低流程误差。

宿主细胞蛋白（HCP）多与细胞关键功能相关，例如细胞增殖、基因转录、蛋白合成修饰、细胞存活及凋亡等，在生产工艺中会因细胞分泌、死亡或裂解而释放。生产过程里，有三大因素主要影响 HCP 的组成与丰度：①宿主细胞基因组调控及培养工艺：特定工艺下，潜在 HCP 数量可能极多，且并非所有基因都会表达，部分基因的表达具有时间和条件特异性；像大肠杆菌约含 4300 个基因，不同工艺产物会经历独特的翻译后修饰，这增加了 HCP 的总数与生化复杂性。研究显示，大肠杆菌表达的蛋白间存在数量差异，这种差异可能是对环境条件的适应性反应，但 85-90% 具有潜在免疫原性的 HCP 在不同发酵过程中均会出现。②产物表达方式：宿主细胞与外源基因、载体及辅助成分构成的体系，可实现稳定、瞬时及诱导表达；以大肠杆菌为例，常见表达形式包括胞内表达、分泌表达、可溶性表达、不溶性包涵体形式，还有融合与非融合表达。③纯化步骤及产品自身特性的影响：纯化过程中能去除 99% 以上的 HCP，但仍有少量残留 HCP 留在产品中，这些残留 HCP 可能与产品结合，随产品一同被纯化。

定制化试剂盒之所以成为宿主细胞蛋白（HCP）残留检测的优先选择，关键原因之一是其构建的检测体系更契合商业化生产中HCP工艺杂质的控制需求。在HCP校准品与HCP抗体这两大关键试剂组分达标后，定制化方法的建立与优化会依托真实的纯化中间品及原液样品开展——通过优化检测条件提升对低浓度HCP的检测灵敏度，从而满足工艺验证与过程控制的需求。临床三期阶段需对生产工艺开展系统验证，以保障其稳定性与可重复性，而定制化HCPELISA检测方法能更准确地监测工艺中HCP的去除效果，为工艺验证提供坚实支撑。过程控制环节，借助工艺特异型HCP ELISA检测方法，可实时监测生产过程中的HCP水平，拥有更强的生产异常预警能力，能及时排查生产风险，保障产品质量稳定。

湖州申科生物专注于研发贴合实际生产工艺的商业化宿主细胞蛋白（HCP）残留检测试剂盒，依托不同工艺下 HCP 的差异化分析，针对性推出各细分工艺领域的 HCP 检测试剂盒。实验数据显示：针对 CHO-S 与 CHO-K1 两种宿主细胞，两类细胞共享 2458 种相同 HCP（占比 79.7%），但各自存在 392 种和 236 种特异性 HCP，充分体现工艺差异带来的残留蛋白特异性。进一步对比 B3 表达菌与 K2 克隆菌，尽管二者共享 1489 种相同蛋白（分别占比 88% 和 85%），但仍各自检出 208 种和 258 种独有蛋白，差异率为 12%-15%。这些结果直接证实，不同工艺路线与克隆株选择会影响 HCP 残留谱的构成。据此，湖州申科提出 “工艺定制化检测” 策略：通过准确识别共性与特异性 HCP，针对性研发细分试剂盒产品。

MDCK（Madin-DarbyCanineKidney，马丁达比犬肾上皮细胞）细胞系是源于犬肾的持续性细胞系，广泛应用于流感病毒增殖纯化、流感疫苗生产等过程，作为细胞基质使用。凭借高病毒产量与滴度、无适应性突变、易驯化等优势，MDCK细胞已成为业界公认的流感病毒毒株分离及流感疫苗生产适配细胞系。和其他产品杂质类似，MDCK宿主残留蛋白（HCP）可能对生物制品的安全性与有效性产生不良影响，因此在生产监测、产品放行等环节，需对其开展定量研究并实施严格控制。SHENTEK^®MDCK HCP残留检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法），是湖州申科生物自主研发、拥有完全自主知识产权且关键试剂实现全国产化的MDCK HCP通用检测试剂盒。该试剂盒适用于基于MDCK细胞基质的病毒增殖纯化、疫苗生产等过程，可对其中的MDCK宿主残留蛋白进行定量检测，且操作步骤简便快捷、检测专一性高、性能稳定可靠。