ELISA法宿主细胞蛋白（HCP）残留检测抗体制备

湖州申科生物专注于提供契合严苛法规要求的宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 检测试剂盒，主要目标是满足抗体药、疫苗等生物制品在 IND/BLA 申报阶段的监管标准。为实现这一目标，公司搭建了全流程依规开发的质量管控体系 —— 整个开发过程严格遵循 ISO 13485 质量标准，同时能充分满足用户审计需求，从体系层面保障产品合规性。其开发流程包含三大关键阶段，前两大基础阶段聚焦关键物料的品质把控：一是 HCP 残留定量检测参考品开发，重点是构建可靠的 HCP 抗原参考品，需完成抗原表征、量值溯源与赋值、均一性验证及稳定性考察等工作，为检测准确性与样品代表性奠定基础；二是高质量大批量抗体制备，通过优化的 HCP 抗原动物免疫策略，搭配严谨的抗体质量标准（含标准制定、覆盖率验证）与稳定的制备工艺，生产出高特异性、广覆盖度的检测抗体，确保后续检测的特异性与灵敏度。

宿主细胞蛋白残留检测中，抗体覆盖率评估实验的操作难度较高，需在实验方法建立阶段对关键步骤开展充分验证，以确保实验方法具备稳健性。湖州申科研发的磁珠捕获式 IMBS 技术（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分离），在开发过程中已对关键步骤进行充分验证，相关验证结果已通过专业评审，具体验证内容（部分）如下：① 方法优化：围绕磁珠与抗体的偶联比例、洗涤液体积、洗涤次数、洗脱次数等关键参数开展优化验证，确保方法稳健性；② 过程质控：二维电泳存在实验步骤繁琐、时间跨度大、中间环节难把控等问题，因此在等电聚焦实验环节引入荧光标记多肽，可快速判定等电聚焦效果；同时在 SDS-PAGE 电泳两侧增设 40 ng 银染质控样品，用于控制银染显色过程；③ 方法重复性：针对 2D 分析与 LC-MS 分析开展重复性验证，其中 2D 分析方法的重复性可达 80% 以上，LC-MS 分析方法的重复性可达 90% 以上；④ 上样量优化：针对 2D 分析与 LC-MS 分析实施上样量验证，规避上样量差异对检测结果的影响；⑤ 假阳性排查：排查样品与阴性抗体间是否存在非特异性结合，确认 IMBS 实验设定的步骤与参数是否会导致假阳性结果。

宿主细胞蛋白（HCP）的来源中，常伴随核酸、胞膜脂类及培养基中的氨基酸等非HCP成分，这些成分会干扰总蛋白检测的准确性，因此在检测前需开展纯化前处理，同时对总蛋白检测方法实施方法学确认。HCP本身属于多蛋白混合物，不同总蛋白定量方法的检测结果会存在一定差异，这也是造成HCP免疫检测方法结果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的检测结果差异较大，通常需同时采用2种及以上经确认的方法进行检测，随后取平均值。总蛋白检测方法的定量限通常只能达到μg/mL级别，而HCP检测试剂盒的产品校准品浓度则处于ng/mL级别。将HCP高浓度原液稀释至低浓度产品校准品的过程中会产生稀释误差，因此需对产品校准品重新进行标定赋值。编辑分享用多种方法确认检测结果时，如何选择合适的方法组合？总蛋白检测定量限与HCP校准品浓度差异大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分对检测的干扰？

湖州申科生物在宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 检测技术领域具备扎实的技术积累，已搭建起高质量、全流程的自主开发平台，覆盖 HCP 检测试剂盒研发的关键环节：①抗原表征与制备：依托合规平台具备 HCP Reference/Antigen 制备能力，借助 2D 凝胶电泳等先进技术保障抗原库的代表性；②动物免疫与抗体制备：凭借自有免疫动物平台，把控免疫原设计及动物免疫过程，产出高特异性、广覆盖度的抗体；③体系开发与验证：依靠成熟技术经验开发高灵敏度、高稳定性的检测体系，并严格遵循 GMP 标准完成方法学验证。该平台通过全流程自主可控的技术整合，从源头保障试剂盒性能的一致性与可靠性，大幅降低不同批次试剂盒的检测变异性。其研发的 HCP ELISA 试剂盒已服务国内外 200 余家生物医药企业，为单抗、疫苗等生物制品的工艺开发、质量控制及 IND/BLA 等法规申报，提供符合监管标准的定制化检测方案。

全球范围内快速增长的抗体、蛋白类等生物药，均由对应的工程细胞生产制备。在生物制品生产流程中，宿主细胞产生的内源性蛋白（即宿主细胞蛋白，Host Cell Proteins, HCPs），会随不同工艺环节部分残留在终产品中。HCPs 作为外源蛋白，可能在不同程度上诱发机体免疫应答，进而引发过敏反应或其他不良反应；此外，部分残留 HCPs 具备蛋白酶或脂酶活性，可能造成蛋白药物或辅料降解，从而加大药物质量与疗效的不稳定性。基于上述风险，对药物中 HCPs 开展定性与定量检测至关重要。全球主要药典（如美国药典、欧洲药典、中国药典）均针对 HCPs 检测制定了具体要求与标准。