生物制品宿主细胞蛋白（HCP）残留检测方法对比

方法选择是影响宿主细胞蛋白（HCP）残留检测结果的因素之一。酶联免疫吸附法（ELISA）与液相色谱 - 质谱联用技术（LC-MS），是当前 HCP 检测领域的两类常用方法。据文献统计，当前在总 HCP 定量检测中，ELISA 仍为主流技术；而 MS 法可用于特定蛋白（如高风险蛋白）的鉴定与定量，已成为重要的互补手段。此外，检测过程中所用试剂与耗材的质量，会直接影响检测结果的准确性。质量不达标的试剂，可能引发检测结果出现假阳性或假阴性。举例来说，若抗体的特异性与亲和力不足，可能在 ELISA 检测中产生交叉反应；若抗原代表性不足或抗体覆盖率偏低，则可能造成漏检；而稀释液抗干扰能力较弱时，也会对检测准确性产生影响。相关案例研究显示，采用定制化方法替代原有商业化试剂盒后，抗原代表性与抗体覆盖率明显提升，HCP 检测值也呈现整体升高的趋势。

LC-MS/MS 作为成熟稳定的蛋白质组学分析技术，依托超高分辨率与准确度，在生物分析领域中占据关键地位。该技术不仅可对低含量宿主细胞残留蛋白（HCP）开展定性检测，还能通过构建专属蛋白质谱库准确鉴定 HCP 的具体种类，为深度解析残留蛋白组成提供重要支撑。不过该技术应用中面临的主要挑战，是如何优化 LC-MS 方法以契合 GMP 规范对产品放行检测的严苛要求。在质谱检测环节，引入表征明确的内标与外标蛋白，可准确分析 HCPs 的整体组成，并有效识别其中具有潜在风险的高风险蛋白。这一技术手段不仅为开发产品专属 HCP ELISA 检测方法提供有力数据支撑，还可助力工艺优化升级，加快推进生物制品从研发到获批上市的全流程进度。

在关键物料开发基础上，湖州申科生物 HCP ELISA 检测试剂盒的开发流程还包含第三大关键阶段 —— 检测体系开发及验证，这一环节直接关系检测方法的可靠性。公司会开展严格的检测体系开发与验证工作，验证方案完全契合 ICH 指导原则及药典中关于分析方法验证的标准要求，确保检测体系的科学性与合规性。同时，为进一步保障产品品质，公司在生产全流程中严格落实物料质量控制，并全程在洁净车间环境中完成生产，从过程管控层面确保试剂盒方法的稳健性、重现性与法规符合性。这套从抗原源头把控，到关键抗体制备，再到检测体系验证与洁净生产的标准化、合规化全流程开发模式，并非单一环节的质量管控，而是形成了完整的品质保障链条，成为湖州申科 宿主细胞蛋白（HCP）残留检测产品品质与可靠性的重点支撑。

宿主细胞蛋白（HCP）多与细胞关键功能相关，像细胞增殖、基因转录、蛋白合成修饰、细胞存活及凋亡等，工艺过程中会通过细胞分泌，或因细胞死亡、裂解而释放。生产环节中，主要有三方面因素影响HCP的组成与丰度：①宿主细胞基因组调控及培养工艺：特定工艺下潜在HCP数量可能极多，且并非所有基因都会表达，部分基因的表达存在时间与条件差异；例如大肠杆菌约含4300个基因，不同工艺产物会经历独特的翻译后修饰，增加HCP的总数与生化复杂性。研究表明，大肠杆菌表达的蛋白存在数量差异，这可能是对环境条件的适应性反应，但85-90%有潜在免疫原性的HCP在不同发酵过程中均会出现。②产物表达方式：宿主细胞与外源基因、载体及辅助成分构成的体系，可实现稳定、瞬时及诱导表达；以大肠杆菌为例，常见的表达形式包括胞内表达、分泌表达、可溶性表达、不溶性包涵体形式，以及融合与非融合表达。③纯化步骤及产品自身特性：纯化过程中能去除99%以上的HCP，但仍有残留HCP保留在产品中，这些残留HCP可能与产品结合，随产品一同完成纯化。

法规推荐的抗体覆盖率评估方法主要分为两类：一类是传统 2D-WB 法，另一类是基于抗体亲和的免疫捕获类方法。传统 2D-WB 法存在诸多不足，如需对蛋白进行变性处理、样品需前处理（会破坏蛋白天然表位）、转膜效率较低、易出现非特异性反应等，因此难以准确反映真实的覆盖率水平。湖州申科自主研发了免疫磁珠捕获分离技术（immunomagnetic beads separation，IMBS），该技术借助免疫磁珠的半液态特性，能在悬浮状态下与 HCP 样本充分混匀并结合；整个过程中蛋白无需变性，且结合方式与 ELISA 检测条件相近，从而可获得更贴近真实情况的覆盖率结果。

在宿主细胞蛋白（HCP）残留检测的分析方法里，ELISA法应用较多，也是QC日常放行检测的主要方式。该方法操作相对简便、检测精度较好，便于设定控制范围与制定技术规范，适用于产品开发及过程控制；不过，ELISA检测依赖抗原与抗体的特异性结合，因此以生物制品中HCP为免疫原制备的抗体质量，对检测结果影响极大。无论是市售ELISA试剂盒，还是实验室自制的多克隆抗体，若抗体的特异性与适用性不足，都可能导致HCP漏检，进而给生物制品质量安全埋下隐患。另外，ELISA检测HCP时采用多克隆抗体，无法针对性反映高风险HCP残留蛋白的实际存在状况。