浙江疫苗产品支原体检测国产替代

MycoSHENTEK^® 支原体 DNA 检测试剂盒参照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原体检测相关要求完成全面性能验证，是经过三方室间验证、性能完全符合药典标准的支原体检测试剂盒。该试剂盒检测灵敏度高达 10CFU/mL，可同时替代传统培养法与指示细胞培养法，大幅缩短检测周期。经实验验证，其对鸡滑液支原体、猪鼻支原体、莱氏无胆甾支原体等多种常见污染菌株的检出率均达到 100%（24/24），即使对口腔支原体等低浓度菌株，检出率也满足 95% 以上。凭借覆盖范围广、灵敏度高、性能稳定、合规性强的关键优势，该试剂盒为生物制品企业提供了高效、可靠的支原体检测工具，助力企业满足全球监管要求并保障产品质量。

可比性验证是支原体检测 NAT 方法替代传统检测方法的关键依据，法规明确要求需将 NAT 法与药典规定的传统方法进行检测限（LOD）对比。若以 NAT 法替代培养法，需证实其检测限≤10CFU/mL；替代指示细胞培养法时，每种被测支原体的检测限需≤100CFU/mL。对比实验需采用相同样本同步开展 NAT 检测与传统方法检测，通过 CFU 可比性分析，确保两种方法的检测结果具有一致性。这一要求既保障了新方法的检测效能不低于传统标准，又为生物制品企业切换检测方法提供了合规依据，兼顾了效率提升与质量安全。

针对不同类型的样品基质，需采用定制化的支原体检测前处理方案，以消除干扰、提升检测效果。细胞悬液需经热处理、样品处理液作用、细胞碎片去除、浓缩离心，再 55℃消化；上清或高浓度质粒样品需先浓缩离心，再用样品处理液作用后 55℃消化；5% 人血白蛋白样品则采用浓缩离心 + 样品处理液作用 + 25℃消化的流程。常见干扰基质包括冻存保护剂、高浓度细胞、代谢产物等，优化前处理可遵循三大原则：提取前通过离心取上清或去除抑制剂预处理样品；高浓度蛋白样本提取时增加蛋白酶 K 用量，增强蛋白降解效果；细胞类样品适当降低细胞数或先裂解细胞，减少细胞基质对检测的干扰。

支原体是一类无细胞壁的原核微生物，直径只有 0.1-0.8 µm，常规 0.22 µm 细菌过滤器无法有效去除，其污染在细胞培养领域极为普遍。这类微生物会严重干扰培养细胞的表型特征与正常生长，给生物制品质量安全带来极大隐患，且与细菌、真菌污染不同，支原体污染通常不会导致培养液浑浊或细胞可见病变，需通过专业方法检测。基于此，FDA、WHO 等全球监管机构及 USP、EP、ChP 等主流药典均明确要求，对测试细胞库（主细胞库、工作细胞库）、下游细胞培养物、终产品及对照细胞等关键环节开展支原体污染筛查，确保生物制品生产全流程安全可控。

外源因子全自动核酸检测分析系统系统在数据追溯与合规管理方面进行了针对性设计，完美适配生物药行业的严格监管要求。系统内置三级权限管理机制，可对操作人员、检测项目、数据访问进行准确管控，同时具备完善的日志审计追踪功能，详细记录检测全流程的关键信息，确保数据可追溯、可核查，完全符合 21CFR Part11 法规要求。数据传输方面，系统支持与 LIMS 实验室信息管理系统无缝对接，实现检测数据的自动同步与集中管理，同时配备 USB 接口，可直接连接打印机打印实验结果，满足企业纸质记录存档需求。这些功能让支原体检测的每一个环节都处于合规管控之下，为企业应对监管检查、保障数据真实性提供了有力支持。

湖州申科的支原体验证菌株是支原体检测 NAT 方法验证的可靠选择，具备多重质量保障。菌株来源可靠，均取自国内外认可的合规机构验证菌株标准盘，溯源至美国模式菌种收集中心（ATCC）、中国兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）等正规保藏机构，获得正式授权商用，如口腔支原体、肺炎支原体溯源至 ATCC，猪鼻支原体溯源至 CVCC。菌株生产在 BSL-2 生物安全实验室开展，符合国家生物安全法标准，针对不同菌株特性逐个优化生产工艺，涵盖超 10 种菌株的主代与工作代。质控环节严谨，采用固体平皿培养法测定 CFU（菌落形成单位），冻存前后均进行检测，确保菌落易观察分离与计数准确性；同时联合官方机构建立数字 PCR 标定方法，开展实验室间对比验证，监控 GC/CFU 比值，保障菌株活性与定量准确性，标定浓度涵盖 10CFU 和 100CFU，满足 NAT 方法验证需求。